He maha nga mahi hurihanga i roto i te hitori o te hangarau rapu i roto i taku hinengaro ko te hangarau tohu tohu i runga i te maapono o te herenga antigen-antibody motuhake, te hangarau PCR me te hangarau raupapa.I tenei ra ka korero tatou mo te hangarau PCR.E ai ki te kukuwhatanga o te hangarau PCR, ka wehea e te tangata te hangarau PCR ki nga reanga e toru: te hangarau PCR noa, te hangarau PCR ine-a-waa me te hangarau PCR mamati.
Ctikanga PCR ommon
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
I hangaia e Kary Mullis te tauhohenga mekameka polymerase (polymerase chain reaction, PCR) i te tau 1983. E kiia ana i te wa e peia ana e ia tana hoa wahine, ka puta ohorere ana te manawa whakatenatena me te whakaaro ki te kaupapa o te PCR (mo nga painga o te taraiwa).I whakawhiwhia a Kary Mullis ki te Nobel Prize in Chemistry i te tau 1993. Ko te korero a te New York Times: "He tino taketake me te whakahirahira, tata te wehewehe i te koiora ki nga waa o mua i te PCR me muri i te PCR.
Ko te kaupapa o te PCR: I raro i te whakamaaramatanga o te DNA polymerase, ka whakamahia te DNA whenu whaea hei tauira, ka whakamahia te papa tuatahi hei timatanga mo te toronga, ko te DNA whenu tamahine e hono ana ki te tauira whenu whaea ka kapehia te DNA i roto i te vitro ma te denaturation, annealing, toronga me etahi atu taahiraa.He hangarau whakakaha te whakahiato DNA i roto i te vitro, ka taea te whakakaha tere me te whakakaha ake i nga DNA whainga in vitro.
Nga painga o te PCR noa
1.Tikanga matarohia, oti nga paerewa o te ao me te whare
2.He iti ake te utu o nga reagents taputapu
3.Ka taea te whakahoki mai i nga hua PCR mo etahi atu whakamatautau koiora ngota
Miihini Foregene PCR e manakohia ana: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Nga hua e pa ana: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Nga ngoikoretanga o te PCR noa
1.ngawari ki te whakapoke
2.mahi uaua
3.te tātari kounga anake
4.Te aro nui
5.He whakakaha kore-motuhake, a ka rite te rahi o te roopu kore-motuhake ki te roopu whaainga, kaore e taea te wehewehe.
CApillary electrophoresis-based PCR
Hei whakautu ki nga ngoikoretanga o te PCR noa, kua whakauruhia e etahi kaihanga nga taputapu i runga i te kaupapa o te electrophoresis capillary.Ko te taahiraa electrophoresis i muri i te whakakaha PCR ka oti i roto i te capillary.He teitei ake te tairongo, a ka taea te wehewehe te rereketanga o nga turanga maha, ka taea te tatau te whakanui e MAERKER.ihirangi hua.Ko te kino ko te hua PCR me whakatuwhera tonu ka maka ki roto i te taputapu, he nui tonu te mate o te poke.
CapillaryErewharewha
2. Hangarau ine PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR) hangarauKo te PCR ine kareoro, e kiia ana ko te PCR Wā-Tuturu, he hangarau ine ine waikawa karihi hou i whakawhanakehia e PE (Perkin Elmer) i te tau 1995. Ko te hitori o te whanaketanga o te PCR ine kororohiko he hitori o nga pakanga whakaohooho wairua o nga tangata nunui penei i a ABI, Roche, me Bio-Rad.Mena kei te pirangi koe, ka taea e koe te tirotiro.Ko tenei tikanga te tikanga PCR tino pakeke me te whakamahia nuitia.
Miihini qPCR Manakohia:https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Tikanga waikano korakora (SYBR Green I):Ko te SYBR Green I te waikano here-ANA e whakamahia nuitia ana mo te PCR ine, e herea kore-motuhake ki te DNA whenu-rua.I roto i te ahua kore utu, ka tukuna e te SYBR Green te korakora ngoikore, engari ka herea ki te DNA paerua-rua, ka piki ake te 1000-whakaheke.No reira, ko te tapeke o te tohu rewharewha e tukuna ana e te tauhohenga he rite ki te nui o te DNA whenu-rua e noho ana, ka piki ake i te pikinga o te hua whakakaha.I te mea ka herea te waikano ki te DNA whenu-rua, ka puta he hua pai.
Nga hua e pa ana: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Tikanga rangahau kareoro (hangarau Taqman): I te waKo te whakanui i te PCR, ka taapirihia he maataki karewharewha motuhake i te wa ano me nga papa tuatahi.Ko te rangahau he oligonucleotide ahorangi, me te roopu kairipoata kareoro me te roopu tineia rewharewha kua tapaina ki nga pito e rua.I te wa e mau tonu ana te rangahau, ko te tohu rewharewha e tukuna ana e te roopu kairipoata ka uruhia e te roopu tineia, me te kitenga Karekau he tohu kareoro;i te wa e whakanuia ana te PCR (i te wahanga toronga), ko te mahi 5'-3' Dicer o Taq enzyme ka keri me te whakaheke i te rangahau, kia wehea ai te roopu rekoata korero me te roopu rekoata tineia, kia taea ai te punaha aroturuki fluorescence Ka taea te whiwhi tohu rewharewha, ara, i nga wa katoa ka whakanuia te mekameka DNA, ka oti te hanga i te mekameka DNA me te whakahiatotanga o te whakahiatotanga o te DNA. te hanganga o nga hua PCR.Ko te tikanga tirotiro a Taqman te tikanga rapu e whakamahia nuitia ana i roto i te rapunga haumanu.
Hua e pa ana: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Nga painga o te qPCR
1.Kua pakeke te tikanga, kua oti nga taputapu tautoko me nga reagents
2.Te utu waenga o nga reagents
3.ngawari ki te whakamahi
4.Te teitei o te kitenga me te motuhake
Nga ngoikoretanga o te qPCR
Ko te whakarereketanga o te ira whainga ka ngaro te kitenga.
Kaore e taea te whakatau i te hua kitenga o te tauira kukū iti.
He nui te hapa i te wa e whakamahi ana i te pihi paerewa mo te rapunga ine.
3. Mamati PCR (matimati PCR, dPCR) hangarau
Ko te PCR Mamati he tikanga mo te inenga tino o nga ngota ngota ngota waikawa karihi.Ka whakatauritea ki te qPCR, ka taea e te PCR mamati te panui tika i te maha o nga ngota ngota DNA/RNA, koinei te inenga tino o nga ngota ngota ngota karihi i te tauira timatanga.I te tau 1999, na Bert Vogelstein raua ko Kenneth W. Kin-zler i whakatakoto te kaupapa o te dPCR.
I te tau 2006, ko Fluidigm te tuatahi ki te whakaputa i tetahi taputapu dPCR e hangai ana i nga maramara arumoni.I te tau 2009, i whakarewahia e Life Technologies nga punaha OpenArray me QuantStudio 12K Flex dPCR.I te tau 2013, i whakarewahia e Life Technologies te punaha QuantStudio 3DdPCR, e whakamahi ana i te hangarau maramara microfluidic nanoscale teitei ki te tohatoha tauira ki te 20,000 nga pūtau takitahi.i roto i te pai tauhohenga.
I te tau 2011, i whakarewahia e Bio-Rad te taputapu QX100 dPCR, e whakamahi ana i te hangarau wai-in-hinu kia rite te tohatoha i te tauira ki te 20,000 pata-wai-in-hinu, me te whakamahi i te kaitatari maturuturu hei tātari i nga rūrūtia.I te tau 2012, i whakarewahia e RainDance te taputapu dPCR RainDrop, i peia e te hau pehanga teitei, hei wehewehe i ia punaha tauhohenga paerewa ki te whakaehunga tauhohenga kei roto 1 miriona ki te 10 miriona nga pata moroiti taumata-picoliter.
I tenei wa, e rua nga wahanga nui o te PCR mamati, te momo maramara me te momo maturuturu.Ahakoa he aha te ahua o te PCR mamati, ko ona maataapono matua ko te whakaiti i te waimeha, te PCR mutunga me te tohatoha Poisson.Ko te punaha tauhohenga PCR paerewa kei roto i nga tauira waikawa karihi ka wehewehea ki nga tekau mano o nga tauhohenga PCR, ka tohatohahia ki nga maramara, ki nga microdroplets ranei, kia taea ai e ia tauhohenga he ngota ngota tauira, ka mahia he tauhohenga PCR tauira-kotahi.Ma te panui i te rewharewha Ka tatauhia te aroaro, te ngaro ranei o te tohu, ka mahia te inenga tino i muri i te whakatikatika o te tohatoha Poisson tauanga.
Ko enei e whai ake nei nga ahuatanga o te maha o nga papaaho PCR mamati kua whakamahia e au:
1. Bio-Rad QX200 droplet mamati PCR Bio-RadKo te QX200 he papahanga PCR matihiko tino matarohia, ko te tikanga rapunga taketake: 20,000 nga tauira ka hangaia e te kaihanga topata Nga pata moroiti wai-in-hinu Ka whakanuia nga pata moroiti wai-i-hinu ki runga i te miihini PCR noa, ka mutu ka panuihia te tohu rewharewha o ia moroiti-patapata e te kaipanui moroiti.He uaua ake te mahi, a ko te tupono o te parahanga he waenga.
Xinyi TD1 moroiti-patapata PCR mamatiKo Xinyi TD1 he papahanga PCR mamati a-whare, ko te tikanga rapunga taketake: whakaputa 30,000-50,000 rūrūtia wai-i-hinu i roto i te kaihanga topata, whakakaha i runga i tetahi taputapu PCR noa, ka mutu ka paahi Ka panuihia e te kaipanui topata te tohu rewharewha o ia maturuturu.Ko te whakaputanga topata me te panui i roto i tenei papaaho ka mahia i roto i te maramara whakatapua me te iti o te mate o te poke.
STILLA Naica moroiti-patapata maramara PCR matihikoKo STILLA Naica he papanga PCR mamati hou.Ko te tukanga rapunga taketake ko: taapirihia te otinga tauhohenga ki te maramara, hoatu te maramara ki roto i te whakatipuranga moroiti-patapata me te punaha whakakaha, ka whakaputa 30,000 moroiti-patapata.Ka horahia ki runga i te maramara, ka oti te whakakaha PCR ki te maramara.Katahi ka whakawhitia te maramara kua whakanuia ki te punaha tātari panui moroiti-te maturuturunga iho, ka panuihia te tohu rewharewha ma te tango pikitia.I te mea ka puta te katoa o nga mahi i roto i te maramara kati, he iti te tupono o te poke.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D maramara PCR mamati
Ko ThermoFisher QuantStudio 3D tetahi atu papaahiko PCR matihiko e ahu mai ana i te maramara.Ko tana tikanga rapunga taketake ko: te whakauru i te otinga tauhohenga ki roto i te horahanga, ka horahia te otinga tauhohenga ki runga i te maramara me te 20,000 microwells i roto i te horahanga., hoatu te maramara ki runga i te miihini PCR hei whakanui ake, ka mutu ka kuhu te maramara ki roto i te kaipanui ka tango whakaahua hei panui i te tohu rewharewha.He tino uaua te mahi, a ka mahia te katoa o nga mahi i roto i te maramara kati, ka iti te tupono o te poke.
5. JN MEDSYS maramara maramara PCR mamati
Ko JN MEDSYS Clarity he papahanga PCR mamati momo maramara hou.Ko tana tukanga rapunga taketake ko: taapirihia te otinga tauhohenga ki roto i te tono, ka horahia te otinga tauhohenga ki runga i te 10,000 ngongo PCR kua mau ki roto i te ngongo PCR ma te tono.I runga i te maramara microporous, ka uru te otinga tauhohenga ki roto i te maramara na roto i te mahi kapi, ka tuuhia te ngongo PCR me te maramara ki runga i te miihini PCR mo te whakakaha, ka mutu ka tukuna te maramara ki roto i te kaipanui ki te panui i te tohu rewharewha ma te tango whakaahua.He uaua ake te mahi.He iti te tupono o te poke.
Ko nga tawhā o ia papaahiko PCR mamati kua whakarāpopotohia e whai ake nei:
Ko nga tohu arotakenga o te papahanga PCR matihiko ko: te maha o nga waeine wehewehe, te maha o nga hongere korikori, te uaua o te mahi me te tupono o te poke.Engari ko te mea nui ko te tika o te kitenga.Ko tetahi huarahi ki te arotake i nga papahanga PCR matihiko ko te whakamahi i nga papahanga PCR matihiko maha hei manatoko tetahi ki tetahi, ko tetahi atu huarahi ko te whakamahi i nga matū paerewa me nga uara tika.
Nga painga o te dPCR
1.Te whakatutuki inenga tino
2.Te tairongo teitei ake me te motuhake
3.Ka kitea nga tauira kape iti
Nga ngoikoretanga o te dPCR1. Nga taputapu utu nui me nga reagents 2. Te mahi uaua me te wa roa e kitea ana 3. He iti te awhe rapunga
I tenei wa, ko nga reanga e toru o te hangarau PCR kei a raatau ake nga painga me nga ngoikoretanga, a kei a ia ano nga waahanga tono, a, ehara i te mea he hononga ka whakakapi tetahi reanga i tetahi.Na te haere tonu o te hangarau kua werohia te oranga hou ki roto i te hangarau PCR, ka taea e ia te iriti i tetahi ahunga tono i muri i tetahi atu, kia pai ake ai te kimi waikawa karihi me te tika.
Puna: Ka haria koe e Takuta Yuan mo te whakamatautau
Hua Manakohia:
Te wa tuku: Noema-18-2022
