Kupu Whakataki:

Ko te RNA, ko te waikawa ribonucleic ingoa pūtaiao, ko tona whakapototanga i ahu mai i te RiboNucleic Acid, he momo waikawa karihi i hangaia ma te hono i te maha rawa o nga ribonucleotides i roto i nga here phosphodiester.

Ko te kaupapa o te torotoro i te RNA ko te tango i te RNA Tapeke kore-parahanga, a ko te maapono taketake o te tangohanga RNA ka taea te whakarapopoto penei e whai ake nei:

1. Whakakotahitia nga ruma i te tuatahi

2. Na ka tango i nga poke macromolecular (pūmua, lipids, DNA, etc.)

3. Ka mutu, ka whakahekehia te RNA i te wa e tango ana i nga tote me nga whakarewa waro, me te purea ano i te RNA.

Te tikanga tangohanga o mua me o naianei

Ko te reanga tuatahi o te tikanga tangohanga RNA ko te TRIzol precipitation tikanga (reagents whakamahia ko te guanidine isothiocyanate, phenol, chloroform, me etahi atu) i hangaia e te koroua ko Piotr Chomczynski me te kuia Nicoletta Sacchi, no te mea ka taea e tenei tenenga te tangohanga RNA Tere me te ngawari, mai i tera wa ka timata te pikinga o te rangahau RNA.

I muri mai, ka hokona e te koroua tenei patent ki a Invitrogen, a, na Invitrogen i whakatairanga tenei tikanga ki te ao, ka noho hei tikanga e whakamahia nuitia ana.

I muri mai, ka riro a Invitrogen e Thermo!

Hua māngai: Invitrogen's TRIzol reagent

Engari, ko te tikanga o te rerenga TRIzol e hiahia ana kia maha nga rerenga me te tangohanga o te RNA, a ko nga reagents e whakamahia ana he paitini me te roa o te mahi.

Na reira, i puta mai te tikanga purenga tuarua-whakatupuranga tīwae-enzyme, ma te whakamahi i te kiriuhi kirikiri kirikiri hei rauemi whakauru waikawa nucleic motuhake hei whakanui ake i te whakaoranga o te RNA i roto i te tauira i te wa e tango ana i etahi atu poke.

Ko te tikanga o te reanga tuarua ka ngawari te mahi i runga i te mahi pumau, te whakaheke i te take morearea, me te whakapai ake i te pai o te tangohanga RNA.

Hua māngai: QIAGEN RNHewari me te nuinga o nga hua o roto

Heoi, ko nga tikanga whakatipuranga tuatahi me te tuarua me whakamahi te DNase ki te tango i te parahanga DNA, e raru ai ki nga whakamatautau o raro.Ko te toenga DNase ka whakaiti i te pai o te tuhi whakamuri me te whakaiti i te whakahiatotanga cDNA whenu tuatahi, na reira ka pa ki te tika o nga hua.

Na reira, ko te tikanga tangohanga tuatoru o nga whakatipuranga ka arotauhia i runga i te kaupapa o te reanga tuarua.Ko te whakamatautau kaore e hiahia ki te taapiri i etahi enzymes, a ka taea te whiwhi RNA me nga pou e rua anake.

Tīwae 1: Tīwae Whakapai-Ana hei whakawātea i te DNA

Tīwae 2: Ko te Tīwae RNA-anake ka toronga me te whakaora i te RNA

Ko taua mahi ngawari kaore i te whakaora noa i te waa, engari ka awhina ano hoki i nga mahi o nga whakamatautau o raro!

Hua māngai: QIAGEN RNeasy Plus meForegeneNga hua raupapa purenga RNA

（RNeasy Plus）

（Foregene'sTipu Tapeke RNA Wehewehenga Kete）

Korero marie!Ko te kete RNA a Foregene e whakaatu ana i te tino ngawari ki te whakamahi RNase Eraser, ka taea te tango i te 400μg o RNase i runga i te mata totoka i roto i te 1 meneti, me te kore e taapiri i nga matū paitini ki te tinana o te tangata!

Pikitia1: Tutohi whakataurite tukanga whakahaere

Ka taea e nga hua o Foregene te whakaoti i te tangohanga RNA i roto i nga waiata e rua, kaua e hae etahi atu ki to ahunga whakamua whakamatautau!

Pikitia2:Ehua whakamatautau tūtohi whakatairite

Ko te reanga tuatahi (1: TRIzol)

Ko te reanga tuarua (2: RNeasy of QIAGEN)

Ko te reanga tuatoru (3: RNeasy plus a QIAGEN, 4: Foregene)

Pikitia3: kauwhata qPCR (kauwhata ānau whakakaha)

Ko te reanga tuatahi (he matomato te tikanga TRIzol -, whero te tikanga TRIzol +)

Ko te reanga tuarua (ko te rangi kahurangi ko QIAGEN RNeasy-, whero ko QIAGEN RNeasy +)

Ko te reanga tuatoru (ko te puru te tikanga QIAGEN RNeasy me, te tikanga kakariki ko Foregene)

(Tuhipoka: Ko te kauwhata qPCR "-" e tohu ana kaore i te taapirihia te DNase me te whakakore i te poke DNA. Na reira, he teitei ake te CT me te kore e tika te hua; "+" e tohu ana kua taapirihia te DNase me te tango i te poke DNA, he tika te hua)

Ko nga whakamohoatanga hangarau katoa ko te tikanga kei te whanake haere te mahi o te whakamatautau i runga i te huarahi ngawari me te pai ake ki te kaiwhakamahi.

Ko te whai a Foregene ki te awhina i etahi atu kairangahau putaiao ki te penapena i te waa me te utu, kia whiwhi nga hua whakamatautau kounga teitei, me te hanga tahi i nga whakatutukitanga rangahau pūtaiao nui ake.