He kupu tairongo te RNase he maha nga akonga e whakahaere ana i nga whakamatautau tangohanga RNA kaore e hiahia ki te whakarongo.I mau patu katoa, ka whakahekehia te RNA i tangohia mai me nga reagents tino paitini phenol me te chloroform.Kaore au i te houhia!!!I tenei ra, ka titiro tatou ki te takenga mai o te Rnase rongonui.

Ko te Ribonuclease (RNase), ko RNase ranei, he karihi ka taea te whakamaarama i te RNA ki nga ngota ngota iti.Ko te RNase, he pūmua ngota ngota iti, he tino pumau .E kore e taea e te whakamahana teitei o te wera me te pehanga teitei te whakahoromata me te aukati pūmua ki te whakakore.Ko te pumau o te RNase te nuinga ka ahu mai i nga here disulfide i roto i te hanganga.Hei tauira, he 124 noa nga waikawa amino i te RNase e whakamahia nuitia ana o te pancreas, engari e 4 nga here disulfide kei roto.Ko te herenga whanariki me te herenga disulfide e whakawhiwhia ana ki te RNase me te tino pai o te waiariki.I tua atu, he iti te taumaha ngota o te rnase, a ka taea e ia te whakahoki wawe i tana hanganga taketake i roto i te maha o nga keehi.

I tua atu i te tino pumau,Kei nga waahi katoa nga RNases i te taiwhanga .Ko te RNase he tikanga tiaki koiora.Mo te pūtau, ka mate te RNA o waho.Ka whakatauritea ki te DNA o waho, he maha ake te kino o te RNA o waho.He harikoa te tuhi me te whakamaoritanga o te RNA, no reira tata katoa nga rauropi kua whanake i nga RNases hei whakamarumaru i te whakaekenga o te RNA o waho.Na reira, ko nga pūtau huakita i whakatipuhia i roto i te taiwhanga me koe e tango ana i te RNA ka puta te kakara o te RNase.Kei roto i nga wai o te tinana o te tangata (te huware, te roimata, me etahi atu) te nui o te RNase, no reira kaua e tangi ina paheke te RNA.Ko te nui ake o to tangi, ko te kino te paheketanga o te RNA!!Kaore a Sister Daiyu e pai mo te tangohanga RNA!

I tua atu, kei roto i to kiri kiri he nui te RNase, me nga tohu, nga pipettes, nga tatau pouaka pouaka, me nga kakau o te tatau kua pa ki te kiri kei roto hoki te RNase.

Na te nui o te rambling, me titiro me pehea te mahi ki a RNases.

Ko te mea tuatahi ka whakaarohia e te katoa ina tangohia te RNA koDEPC(diethyl pyrocarbonate).Ko te DEPC te nuinga ka whakakore i te pūmua ma te whakakotahi ki te mowhiti imidazole o te histidine roopu kaha RNase, na reira ka aukati i te mahi o te enzyme.0.1% Ka taea e te DEPC te tango i te painga pai ake ki te Rnase, engari me aro mai he mate pukupuku te DEPC, na reira me aro nui ki te whakamahi.

Mo te RNase, me timata mai i nga waahanga e rua,Ko te tuatahi ko te aukati i te mahi o te RNase endogenous

Ko nga reagents tangohanga RNA tikanga penei i te guanidine isothiocyanate me te DTT kei roto i te Trizol ka taea te whakatuwhera i te here disulfide o RNase, engari kei reira tonu etahi RNases, ina koa i roto i nga tauira kiko, na kia tupato ki te iti o te pāmahana.

1.Rukuhia te tauira kiko ki roto i te hauota wai i muri i te tango atu, ki roto ranei i te otinga tiaki RNA arumoni.

2.Whai muri i te tangohanga o te RNA o te tauira pūtau, tāpirihia ki te otinga lysis ka lyse ki runga i te pouaka tio

3. He pai ake te whakamahi hauota wai mo te huri i te wa e whakakotahi ana nga tauira kiko.A, no te whakamahi i te homogenizer hiko kahore hauota wai, whakarongo ki te tino whakamatao i mua i te whāurutau homogenate.

Ko te tuarua ko te DNase o waho

1.Kia mau patu, mau i te koti taiwhanga, mau i te kanohi kanohi, kia mau ki te rua o nga karapu hou (kaua e tino kakama!! Me tohu he tino pirau a Trizol, he kaha hoki na roto i nga karapu, no reira kaua e maturuturu ki o ringaringa).

2.Ko nga tohutohu paipa katoa kua whakamahia, nga ngongo EP, nga ngongo PCR me etahi atu taputapu me whakakorehia e RNase.Ka taea te whakamakuku ki te 0.1% DEPC katahi ka pehia i raro i te pehanga teitei.Kia whai whakaaro ki te mahi i roto i te kohu kohu.Ka taea e nga kaitukino o te rohe te hoko tika i nga taonga mo te tango i nga whaa.

PS: Me korero atu he tikanga mangere.Ahakoa kaore e taea e te pāmahana teitei me te pehanga teitei te tango i te RNase, ka tangohia e ia tetahi waahanga nui.Ko nga wa 2 o te teitei o te wera me te teitei o te pehanga he pai te painga, a he iti te painga o te tangohanga o te RNA.

3.Ka taea e te waipiro te whakakore i nga pūmua,na te tepu tangohanga RNA ka taea te muru ki te 75% waipiro , ka taea hoki te rehu ki te waipiro.

4.Ko te otinga whakarewa RNA whakamutunga me te ngongo centrifuge me de-RNase te maimoatanga.Ko te wai DEPC he otinga whakangao RNA e whakamahia ana.Me korero tatou mo te tikanga whakarite tika mo te wai DEPC (mahara ki te whakarakau ano i te DEPC arumoni ina hoko koe)

Tāpirihia te DEPC ki te wai ultrapure i te 1:1000, ruru pai, kia tu mo te po i te 37°C, ka whakahoroa i te 121°C i raro i te pāmahana teitei me te pehanga teitei mo te 15 meneti.Ka taea te penapena wai DEPC ki -20°C i roto i te 1ml aliquots.

Ka mutu, ki te whakarapopototanga: ko te iti o te mahana te mea nui, he pai te whakahaere i nga taonga pau, he mau patu me te iti o te korero!

Kaati, koira mo te rautaki o tenei ra.Kei te hiahia ahau ki a koe te kukū RNA katoa me te ma i korerotia e koe.Ko te A260/A280 e rua he 2.0!!!

O te akoranga, ki te whakamahi koe i temahi pāmahana rūma kete tangohanga RNA, kaore pea koe e pa ki nga raru o runga ake nei.

Ko te mahi i te pāmahana rūma, me te kore taapiri i te DNase, ka tangohia te tapeke RNA mai i nga pūtau i roto i te 11 meneti, me te tango i te RNA katoa mai i nga kopa kararehe, tipu ranei i roto i te 30 meneti.

Mo nga tauira whakamatautau, waea atu ki:overseas@foregene.com

Hua e Pa ana:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/