1: Whakakapihia nga taputapu whakamatautau i te waa

Whakaritea (NTC) mana toraro ka tukurua kia maha nga wa.Ina kitea he pokenga hua PCR kei roto i te taiwhanga, whakakapi i nga taputapu whakamatautau katoa i te waa.Pēnei i te: waimeha ano me te whakarite i nga mea tuatahi, whakahoroa ano te pito paipa, ngongo EP, ddH2O, me era atu, whakakapi ki te paipa hou, me te tono mo te wa poto i etahi atu taiwhanga hei mahi whakamatautau PCR.Ko te taiwhanga poke me whakamaarama me te whakamaarama ki nga hihi ultraviolet tae noa ki te whakakore i te pokenga hua PCR i mua i te haere ki te whakamatautau.

2: Whakaroahia te wa whakaatu UV

He mea tika ki te tango i te poke o te DNA, me whakaroahia te radiation ultraviolet i nga haora e 2 atu i o mua.Ahakoa, ko te painga o te iraradiation UV ki te tango i nga kongakonga iti (i raro iho i te 200bp) o te poke DNA kaore i te pai.

Ko te roangaru Ultraviolet (nm) te tikanga 254/300nm, a he ranea ki te whiti mo te 30 meneti.Me tohu ko te wa e whiriwhiri ana i te UV ki te whakakore i te poke o nga toenga PCR hua, me whakaarohia te roa o te hua PCR me te tohatoha o nga turanga i roto i te raupapa hua.He whai hua noa te irradiation UV mo nga kongakonga roa i runga ake i te 500 bp, a he iti noa te paanga ki nga kongakonga poto.

I te wa o te whakamaaramatanga o te UV, ko nga turanga pyrimidine i roto i te hua PCR ka hanga dimer.Ka taea e enei dimer te whakamutu i te toronga, engari kaore e taea e nga pyrimidines katoa o te mekameka DNA te hanga dimer, ka taea hoki e te irarangi UV te wawahi i nga dimer..Ko te tohu o te hanga dimer e whakawhirinaki ana ki te roangaru UV, te momo pyrimidine dimer me te raupapa o nga nucleotides e tata ana ki te waahi dimer.No reira, ki te mea he iti nga kongakonga kua whakanuia e te PCR, e taunaki ana kia whakamahia te punaha whakakino hua anti-PCR UNG.

3:Ko nga kaiparapara parahanga DNA e whakamahia ana

He ngawari te hanga aerosol ina whakauruhia nga pipette, he uaua ki te karo, ka tere te tau.No reira, kare e kore he pai te whiriwhiri ki te whakamahi auau i nga kaiparapara parahanga DNA motuhake hei aukati i te horapa o te parahanga DNA.

4:Whakamahia te punaha aukati-parahanga UNG

I muri i te tangohanga o te pokenga hua PCR, ka taea e te taiwhanga whakamatautau te whakamahi i te punaha whakakino hua anti-PCR UNG hei aukati i te pokenga hua PCR.I roto i nga taiwhanga whaanui, ka taea e koe te mahi i nga waahanga whakamatautau ngawari, te wehe i te waahi hua PCR mai i etahi atu waahi, te whakarite i etahi ture taiwhanga me nga ture, me te whakahaere whakangungu e tika ana hei aukati i te paheketanga o te hua PCR.

Nga Tohutohu: Ko te whakatuu taiwhanga PCR tika, te pupuri i te taiao PCR pai, te whakatakoto i nga tikanga whakahaere PCR paerewa, me te whakatipu i te mohiotanga kaha o te mahi a nga kaiwhakamatautau ko nga mea matua hei aukati, hei whakaiti ranei i te parahanga o nga whakamatautau PCR.