Arataki

Roa kore-waehere RNA, lncRNA he RNA kore-waehere me te roa nui atu i te 200 nucleotides, te tikanga i waenganui i te 200-100000 nt.Ko te lncRNA e whakahaere ana i nga whakaaturanga ira i te epigenetic, te tuhi me te pou-whakawhitinga taumata, me te whai waahi ki te whakamutua o te chromosome X, te tohu ira me te whakarereketanga o te chromatin, te whakahohe i te tuhinga, te whakararu i te whakamaoritanga, te kawe karihi, te huringa huringa pūtau, te ture rereketanga o te pūtau, me nga paanga o te horopeta (whakaritenga me te aukati i etahi atu mate e pa ana ki te mate) , a i tenei wa ko tetahi o nga waahi wera i roto i te mara o te biomedicine.

01  Nga momo me nga ahuatanga o te LncRNA

Kua wehea te lncRNA ki nga momo maha e ai ki nga puna rereke o tona hanganga, penei i te ahua o runga.Kei a ia nga ahuatanga e whai ake nei:

1. He roa ake nga lncRNA, me te whakaputanga hihiri me nga tikanga honohono rereke i te wa rereke
2. Ka whakatauritea ki nga ira whakawaehere, he iti ake te taumata whakahuatanga o te lncRNA
3. Ko te nuinga o nga lncRNA e kitea ana te ahua o te waahi me te waahi mokowhiti i roto i te tukanga o te rereketanga me te whanaketanga o te kiko.
4. He tohu tohu kei roto i nga pukupuku me etahi atu mate
5. He kanorau nga waahi o roto o te lncRNA
6. He iti te raupapa i roto i te tiaki, engari ko te mahi he tohu o te tiaki, etc.

02 Nga Uiuinga Auau mo te LncRNA Reverse Transcription

Na te iti o nga ihirangi o te lncRNA i roto i nga pūtau, te roa roa me te hanganga taumata teitei, he maha nga hanganga uaua o taua RNA penei i nga kopae kakau, i nga makawe makawe ranei, a ko te RT-qPCR he raru ki nga raru o te whakamuri whakamuri kaore i te angitu, he iti ranei te mahi.

03 LncRNA otinga whakawhiti whakamuri

I roto i te ture matua, ko te tukanga o nga huaketo RNA e whakamahi ana i o raatau ake whakawhitinga whakamuri ki te whakahiato i te DNA ma te whakamahi i te RNA hei tauira ka kiia ko te whakawhitinga whakamuri.Ko te tukanga o te whakamahi i te RNA huaketo reverse transcriptase ki te whakahiato i te tauira cDNA in vitro ka kiia ko te whakawhitinga whakamuri.Ko nga mea matua kei roto i te punaha whakawhiti whakamuri: tauira RNA, whakamuri transcriptase, primers me etahi atu waahanga.

1.Tairaira RNA

Ko te awe o te tauira RNA i runga i te tuhi whakamuri ka kitea i roto i tona hanganga, te ma me te pono.Ko te teitei ake o te ma me te pono o te RNA kua tangohia, ko te teitei ake o te kaha o te whakawhitinga whakamuri me te tika ake o nga hua ine e whai ake nei.Ko te RNA kua purea e nga reagents tangohanga RNA e whakamahia ana he maha nga toenga o te waipiro me te tote guanidine, he kaha te aukati i te nuinga o nga transcriptase whakamuri.

2. Whakamuri transcriptase

He awe nui te whakamuri transcriptase i roto i te punaha whakamuri katoa.Ko te pāmahana e tika ana mo te whakamuri transcriptase e whakamahia ana i te nuinga o nga taiwhanga ko te 42°C.Ko te tikanga, ko te whakatuwheratanga o te hanganga RNA teitei e hiahia ana kia teitei ake te pāmahana, a, ko nga whakaritenga mo te whakawhitinga whakamuri he teitei ake.

3.Primer

Kei roto i nga tuhinga tuatahi o te tuhi whakamuri nga tohu tuatahi mo te ira, te matapōkere me te Oligo dT tuatahi.Ko te nuinga o nga lncRNA karekau he hiku polyA, a he mea nui kia taurite tika ki nga timatanga matapōkere me Oligo dT.

4.Ko etahi atu waahanga

I runga i te ahua o te RNA he tino ngawari ki te whakaheke, ka taea te whakaiti i te whakauru o nga waahanga i roto i te punaha whakawhiti whakamuri, ka taea te aukati i te urunga o te RNase me te whakarite kia pai te ahunga whakamua o te tuhinga whakamuri.

Foregeneka whiwhi mai i te tauira RNA, whakamuri te tuhi ki te qPCR

Whakanuia to rapunga lncRNA

Kararehe Tapeke RNA IwhakamomoriKete (me te tīwae tango gDNA)

Pūtau Tapeke RNA IwhakamomoriKete (me te tīwae tango gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Me te gDNase)(Super Premix mo te whenu tuatahi te whakahiato cDNA mai i te lncRNA)

Wā Tuturu PCR EasyTM-SYBR Green I

Apainga ofTangohanga RNA:

Ka whakamahia e te kete te hangarau tangohanga RNA tuatoru-whakatupuranga, kaore he take ki te whakamahi i te DNase.

11 meneti mai i te 96, 24, 12, me te 6-well plate cultured cells, te tangohanga teitei o te gDNA-kore, te parakore, te kounga teitei o te RNA pūtau katoa.

Nga painga o te tuhi whakamuri lncRNA:

He punaha tuhi whakamuri i hangaia mo LncRNA kia tere te tango i te poke DNA ira.

Ko te punaha tuhi whakamuri he teitei te waiariki, he pai tonu te mahi whakamuri i te 50°C.

Ko nga tauira he nui te ihirangi GC me te hanganga tuarua matatini ka taea te huri me te tino pai.

Nga paingaof qPCR:

Ko te timatanga wera ko te Foregene Taq Polymerase he pai ake te whakakaha ake, teitei ake te tairongo whakakaha, me te motuhake whakakaha ake.

Ko te Whakakotahitanga Maamaa PCR Tuturu kua arotauhia ka hanga SYBR Green He teitei ake taku arokitenga, a ko te kaha o te rewharewha he 3-5 nga wa o nga hua rite, ka taea te whakatutuki i nga hiahia o nga momo whakamatautau ine ine.