Ko te PCR te hangarau whakakaha waikawa karihi e whakamahia nuitia ana, a, e whakamahia nuitia ana na te kaha me te motuhake.Heoi, ka hiahia te PCR ki te whakahekenga waiariki me te kore e taea te whakakore i nga herenga o te whakawhirinaki ki nga taputapu me nga taputapu, e whakatiki ana i tana tono ki nga whakamatautau haumanu.

Mai i te timatanga o te tekau tau atu i 1990, he maha nga whare taiwhanga kua timata ki te whakawhanake i nga hangarau whakakaha i te pāmahana e kore e hiahiatia kia whakahekehia te waiariki.Inaianei kua whakawhanakehia e ratou te hangarau whakakaha hauwaariki takawaenga, te hangarau whakakaha weariki whakakapi whenu, te hangarau whakakaha hauwaro porowhita porowhita, me te whakawhirinaki raupapa waikawa karihi.Hangarau whakakaha Isothermal me etahi atu hangarau. 

Loop-mediated isothermal amplification

Ko te maataapono whakakaha i runga i te meka kei roto te DNA i te ahua taurite hihiri i te 65°C.Ina ka honoa tetahi papa tuatahi ka toro atu ki te waahanga taapiri o te DNA whenu-rua, ka wehe te tahi atu whenu ka noho hei whenu kotahi.

I tenei pāmahana, ka whakamahia e te DNA nga tohu tuatahi e 4 ki te whakawhirinaki ki te whenu-displacement DNA polymerase hei hanga i te whakahiatotanga o te whenu-displacement DNA kia huri haere tonu.

Tuatahi whakatauhia nga rohe motuhake e 6 F3, F2, F1, B1, B2, B3 i runga i te ira i whaaia, katahi ka hoahoatia kia 4 nga waahanga tuatahi i runga i enei rohe motuhake e 6 (e whakaatu ana i te ahua i raro nei):

Ko te tuatahi o roto o mua (FIP) ko te F1c me te F2.

Ko te tuatahi o roto whakamuri (BIP) he B1c me B2, ka whakamahia te TTTT hei mokowhiti i waenganui.

Ko nga mea tuatahi o waho F3 me B3 he mea tito mai i nga rohe F3 me B3 kei runga i te ira kua tohua.

I roto i te punaha tauhohenga LAMP, ko te kukū o te tuatahi o roto he maha nga wa o te tuatahi o waho.Ko te tuatahi o roto ka honoa ki te whenu tauira hei whakahiato i tetahi whenu taapiri hei hanga i te whenu takirua DNA.I muri iho, ka honoa te papa o waho ki te whenu tauira hei hanga i te whenu takirua DNA.I raro i te mahi a te BstDNA polymerase, ka tukuna te whenu taapiri i whakahiatohia e te tuatahi o roto.Whai muri i te maha o nga tauhohenga, ka hanga e te whenu taapiri he whenu DNA kotahi me te hanganga dumbbell.

Ko te whenu DNA kotahi te anga dumbbell ka whakamahia hei tauira ki te hanga tonu i te hanganga kakau-koropiko whakawhiti DNA me te pito tuwhera.Ko nga mea tuatahi o roto, o waho hoki e arahi ana i te DNA hanganga kakau-koropiko whakawhiti ki te haere tonu i te nekenga whenu me nga tauhohenga toronga, ka mutu ka hanga i nga anga-a-papa maha he rereke te roa.Te ranunga DNA.

Nga painga me nga ngoikoretanga o te whakakaha hau werawera-whakawhitiwhiti

Nga painga o te LAMP:

(1) Te kaha o te kaha whakakaha, ka taea te whakanui i te 1-10 kape o te ira ira i roto i te 1h, a ko te kaha o te whakakaha he 10-100 nga wa o te PCR noa.

(2) He poto te wa urupare, he kaha te motuhake, kaore he taputapu motuhake e hiahiatia ana.

Nga ngoikoretanga o te LAMP:

(1) He tino tiketike nga whakaritenga mo nga kaupapa tuatahi.

(2) Kaore e taea te whakamahi i te hua whakakaha mo te whakamaarama me te raupapa, engari ka taea anake te whakamahi mo te whakawakanga.

(3) Na te kaha o te aro, he ngawari te hanga aerosol, ka puta he hua teka me te pa ki nga hua whakamatautau.

Ste whakanekehanga o te whakawhiti

Ko te strand displacement amplification (SDA) he tikanga whakakaha in vitro isothermal DNA i ahu mai i te tauhohenga enzymatic i whakaarohia tuatahitia e te tohunga Amerika a Walker i te tau 1992.

Kei roto i te punaha taketake o SDA he endonuclease here, he polymerase DNA me te mahi whakaneke whenu, e rua nga takirua tuatahi, nga dNTP, me nga katote konupora me te konupora me nga punaha buffer.

Ko te maataapono o te whakakaha i te whenu whakanekehanga i ahu mai i te raupapa whakamohiotanga endonuclease herenga matū kua whakarereketia i nga pito e rua o te DNA i whäia.Ka whakatuwherahia e te endonuclease te aputa i roto i te whenu DNA i tona waahi mohiotanga, ka toro atu te polymerase DNA i te aputa 3′ Whakamutunga ka whakakapi i te whenu DNA e whai ake nei.

Ko nga whenu kotahi o te DNA kua whakakapihia ka taea te whakakotahi me nga mea tuatahi ka toro atu ki nga whenu takirua e te DNA polymerase.Ka tukuna tonutia tenei tukanga, kia pai ai te whakanui i te raupapatanga o te whaainga.

Nga painga me nga ngoikoretanga o te hangarau whakakaha i te whenu displacement

Nga painga o te SDA:

He tiketike te kaha o te whakanui, he poto te wa urupare, he kaha te motuhake, kaore he taputapu motuhake e hiahiatia ana.

Nga ngoikoretanga o SDA:

Ko nga hua kaore i te rite, a, ko etahi o nga waahanga kotahi me nga waahanga-rua ka mahia i nga wa katoa i roto i te huringa SDA, a, ka puta te hiku ina kitea e te electrophoresis.

Rwhakakaha porowhita olling

Ko te whakanui i te porowhita hurihuri (RCA) ka whakaarohia ma te tuhi i te tikanga o te kape i te DNA mai i nga rauropi pathogenic ma te porowhita hurihuri.E pa ana ki te whakamahi i te DNA porowhita kotahi-waa hei tauira i te mahana tonu, me te polymerase DNA motuhake (penei i te Phi29) ) I raro i te mahi o te whakahiatotanga DNA porowhita hurihuri ki te whakatutuki i te whakanui o te ira ira.

Ka taea te wehea te RCA ki te whakakaha raina me te whakanui taupū.Ko te kaha o te RCA raina ka eke ki te 10⁵nga wa, me te kaha o te RCA taupū ka eke ki te 10⁹wā.

Ko te wehewehenga ngawari, penei i te ahua i raro nei, ko te whakakaha raina a 1 anake te whakamahi tuatahi, ko te whakakaha taurangi b e 2 nga timatanga.

Ko te RCA raina ka kiia hoki ko te RCA tuatahi.Ka herea te tuatahi ki te DNA porohita, ka whakaroahia e te mahi a te DNA polymerase.Ko te hua he whenu kotahi me te maha o nga raupapa tukurua e hia mano nga wa te roa o te kapiti kotahi.

I te mea ko te hua o te raina RCA e hono tonu ana ki te timatanga tuatahi, ko te ngawari te whakatika o te tohu he painga nui.

RCA taupū, e mohiotia ana ano ko te Hyper branched amplification HRCA (Hyper branched RCA), i roto i te RCA taupū, kotahi te tuatahi ka whakanui i te hua RCA, ko te tuatahi tuarua ka whakakotahi ki te hua RCA me te toro atu, a kua herea kē te whakakapinga ki te hua RCA Ko nga primers o raro ka whakawhānui i te whenu, ka tukurua i te toronga me te whakakapi hei whakaputa i te hua RCA amp dendritic.

Ko nga painga me nga huakore o te whakakaha i te porowhita porowhita nucleic acid amplification

Nga painga o te RCA:

Te tairongo teitei, te motuhake pai me te mahi ngawari.

Nga ngoikoretanga o RCA:

Nga raruraru papamuri i te wa e kitea ana te tohu.I te wa o te tauhohenga RCA, ka puta pea he tohu papamuri e te rangahau patiki kore porohita me te tauira DNA, RNA ranei o te rangahau kore here. 

Nucleicacid-a-raupapa-a-raupapa whakanui

Ko te whakakaha i runga i te raupapa-a-raupapa waikawa Nucleic (NASBA) he hangarau hou i whakawhanakehia i runga i te PCR.He whakakaha waikawa karihi e haere tonu ana me te hauhauariki e arahina ana e te rua o nga papa tuatahi me te raupapa kaiwhakatairanga T7.Ka taea e te hangarau te whakanui i te tauira RNA ma te 109 nga wa i roto i te 2 haora, he 1000 nga wa teitei ake i te tikanga PCR tikanga, kaore e hiahiatia he taputapu motuhake.

I whakamahia tenei hangarau mo te tirotiro tere i nga mate i te wa ka puta mai, a he maha nga kamupene kei te whakamahi i tenei tikanga i roto i nga kete rapu RNA.

Ahakoa ka taea hoki e te whakakaha RNA te whakamahi i te hangarau PCR whakamuri, kei a NASBA ona ake painga: ka taea te whakahaere i raro i nga ahuatanga o te pāmahana, he pai ake, he tika atu i te hangarau PCR tuku iho.

Ko te tauhohenga kei te 41 nga nekehanga Celsius me te hiahia AMV (avian myeloblastosis huaketo) whakamuri transcriptase, RNase H, T7 RNA polymerase me te rua o nga tuatahi ki te whakaoti.

Ko te nuinga o te tukanga ko:

Kei roto i te tuatahi o mua te raupapa taapiri o te kaiwhakatairanga T7.I te wa o te tauhohenga, ka herea te tuatahi o mua ki te whenu RNA, ka whakakorikorihia e te enzyme AMV hei hanga i te whenu takirua DNA-RNA.

Ka kemu a RNase H i te RNA i roto i te whenu-rua ranu me te pupuri i te DNA whenu kotahi.

I raro i te mahi a te tuatahi whakamuri me te enzyme AMV, ka hangaia he whenu takirua DNA kei roto te raupapa kaiwhakatairanga T7.

I raro i te mahi a te T7 RNA polymerase, kua oti te mahi tuhi me te nui o te RNA whainga ka puta.

Nga painga o te NASBA:

(1) Ko tana tuatahi he raupapa kaiwhakatairanga T7, engari ko te DNA taurua-rua o tawahi kaore he raupapa kaiwhakatairanga T7 kaore e taea te whakanui ake, na tenei hangarau he tino motuhake me te maarama.

(2) Ko te NASBA te whakauru tika i te tukanga whakawhiti whakamuri ki te tauhohenga whakakaha, ka whakapoto i te wa tauhohenga.

Nga kino o te NASBA:

(1) Ko nga waahanga tauhohenga he uaua ake.

(2) E toru nga momo enzyme e hiahiatia ana kia nui ake te utu o te tauhohenga.