Mīhini PCR|Kei te tino marama koe?

Hangarau PCR toa Nobel

I te tau 1993, i whakawhiwhia e te kaiputaiao o Amerika a Mulis te Tohu Nobel mo te Matū, a ko tana whakatutukitanga ko te hangahanga o te hangarau PCR.Ko te makutu o te hangarau PCR kei roto i nga ahuatanga e whai ake nei: Tuatahi, he iti rawa te nui o te DNA hei whakanui ake, me te tikanga ka taea te whakamahi i tetahi ngota ngota hei whakakaha;tuarua, he nui te kaha o te whakakaha, a he taunga te nui o te ira i whäia.Whakanuia, neke atu i te 10 miriona nga wa i roto i etahi haora.Inaianei kua whakamahia nuitia te taputapu PCR ki te rangahau putaiao ora me te maha atu o nga waahanga.

Ko nga tauira rereke me nga kaihanga o nga kaieke hiko waiariki ka whakaatu i nga mahi rereke me te tukurua.Ko enei rereketanga ka pa ki te mahi PCR anake engari ki te tika me te riterite o nga raraunga kua riro.Ma te mohio ki nga ahuatanga miihini PCR ka awhina tatou ki te whakanui ake i te angitu o a maatau whakamatautau.

Kōwae whakawera

Ko te tika o te pāmahana o te kaieke waiariki hei whakatau mo te angitu, te kore ranei o te PCR.He mea nui ano te riterite o te pāmahana pai-ki-pai i runga i te poraka whakamahana kia whiwhi hua pono me te whakaputa PCR.

Ko tetahi huarahi ki te whakarite i te tika o te waiariki ko te whakamatautau i nga wa katoa ma te whakamahi i nga kete whakamaarama whakamahana me te whakatikatika i nga wa e hiahiatia ana e tetahi tohunga ngaio kua whakangungua.I te nuinga o te waa ka whakamahia nga whakamatautau whakamaarama ki:

Ko te tika o te pai-ki-pai e pa ana ki te tautuhi i te pāmahana i roto i te aratau hauwaro

Te tika o te pai-ki-pai e pa ana ki te tautuhi i te pāmahana i muri i te huringa pāmahana

Te Tikanga o te Wera Panui

Primer Annealing Te Mana Te pāmahana

Ko te whakahaere i te pāmahana rōnaki he mahi a te taputapu PCR e whakaahei ana i te arotautanga o te whakamaarama tuatahi i roto i te PCR.Ko te kaupapa o te whakatakotoranga rōnaki ko te whakatutuki i ngā pāmahana rerekē i waenga i ngā kōwae, ā, mā te ≥2°C te pikinga o te pāmahana me te taka i waenga i ia tīwae, ka taea te whakamatautau i nga pāmahana rereke i te wa kotahi ki te whiwhi i te tino pai o te pāmahana annealing tuatahi.Ko te tikanga, ka tutuki te rōnaki pono i te pāmahana rārangi i waenga i ngā kōwae.

Heoi ano, ka whakamahia e nga kaieke hiko waiariki te tikanga kotahi te poraka waiariki me te whakahaere i te pāmahana ma roto i nga huānga whakamahana me te whakamahana e rua kei nga pito e rua, i te nuinga o nga wa ka puta mai nga here e whai ake nei:

E rua anake nga pāmahana ka taea te whakarite: ko nga pāmahana teitei me te iti mo te whakaeneene tuatahi ka whakatauhia ki nga pito e rua o te kōwae waiariki, a, kaore e taea te whakarite tika o etahi atu pāmahana i waenga i te waahanga.

Na te whakawhitinga wera i waenga i nga pou rereke, ko te pāmahana i waenga i nga rohe rereke i runga i te waahanga ka kaha ake te whai i te pihi sigmoidal, kaua i te rōnaki raina pono.

Tauira pāmahana

Ko te kaha o te kaihurihuri waiariki ki te whakahaere i te tauira pāmahana he mea tino nui mo te tika o nga hua PCR.He mea nui nga tawhā taputapu-motuhake penei i te reiti ramp, te wa pupuri, me te algorithm mo te matapae i te pāmahana tauira.

Ko te tere o te whakamahana me te whakamahana o te miihini PCR te tikanga ka huri te pāmahana i waenga i nga hikoi PCR ka puta i roto i tetahi waa.I te mea he roa te wa mo te wera ki te whakawhiti mai i te kōwae ki te tauira, ka tere ake te whakamahana me te whakamahana o te tauira.No reira, ko te whakamaramatanga o te tere huringa pāmahana me wehewehe me te maarama.

Ko te morahi, ko te teitei o te reeti o te reiti, ko te huringa tere o te pāmahana ka taea e te kōwae te whakatutuki i roto i te waa iti rawa i te wa o te ramp.

Ko te toharite o te reiti o te rapae poraka e tohu ana i te tere o te huringa o te pāmahana i roto i te waa roa, ka nui ake te tohu o te tere miihini PCR.

Ko te teitei o te tauira whakamahana me te reiti whakamahana me te tauira toharite whakamahana me te reiti whakamahana e whakaata ana i te tino pāmahana i riro mai i te tauira.Ko te tere o te whakamahana tauira me te whakamahana ka whakarato i te whakataurite tika ake mo te mahi a te miihini PCR me tona paanga pea ki nga hua PCR.

I te wa e mahi ana i te whakakapinga pahikara, e taunaki ana kia whakamahia he taputapu me te hotaka reeti reeti e whakataurite ana i te aratau o mua kia ngawari ake te whakakapi me te iti o te paanga ki te tukurua PCR.

Me hoahoa te kaieke waiariki ki te wa i muri i te taenga o te tauira ki te pāmahana kua whakaritea.I tenei ara, ko te wa e mau tonu ai te tauira i te pāmahana kua whakaritea ka tino tika te pupuri me nga tikanga huringa e tika ana e hiahiatia ana i roto i te mahi whakahaere.

He maha nga wa ka whakamahia e nga kaieke paihikara ngaariki i nga huringa pangarau matatini kia tere ai nga tauira ki te eke ki te pāmahana kua whakaritea e ai ki tetahi kaupapa tatūkē.I runga i te nui o te punaha tauhohenga me te matotoru o nga kirihou PCR i whakamahia, ka taea e te algorithm te matapae i te pāmahana o te tauira me te wa ka tae ki te pāmahana kua whakaritea.Ma te whakawhirinaki ki enei algorithms, i te wa e whakamahana ana, e whakamahana ana ranei o te kaihurihuri waiariki, ka nui ake te pāmahana paraka i te uara kua whakaritea ma te tikanga e kiia nei ko te poraka waiariki overshoot or undershoot.Ko taua tatūnga ka whakarite kia tere te tae o te tauira ki te pāmahana kua whakaritea me te kore e tukituki, e kore e pakaru ake.

Te whakaputanga whakamatautau

Ko nga mea ka taea te whakanui ake i te urunga o te kaihuri hiko waiariki ko te reiti ramp, te whirihoranga poraka waiariki, me te whakaurunga o nga papaahiko aunoatanga.

Ko te tere whakawera me te whakamatao o te kaihurihuri waiariki e tohu ana i te tere ka tae ki te pāmahana kua whakaritea.Ko te tere o te piki me te heke o te pāmahana, ka tere ake te rere o te PCR, ko te tikanga ka nui ake nga whakamatautau ka taea i roto i te waa kua whakaritea.I tua atu, ka taea te whakatere i nga whakamatautau ma te whakamahi i nga polymerases DNA tere.

He mea nui ano te hoahoa o te waahanga hiko hiko wera mo nga whakamatautau PCR.Hei tauira, ko nga waahanga whakakapi ka taea te ngawari ki te maha o nga tauira mo ia oma.I tua atu, he pai nga waahanga whakawera me nga waahanga whakahaere takitahi mo te whakahaere i nga kaupapa PCR rereke i te wa kotahi i runga i te miihini hiko waiariki.

Mo te PCR teitei-aunoa, ko te raupaparorohiko e whakahaere ana i te punaha whakahaere paipa paipa me whai hotaka me te hototahi.He pai nga punaha aunoa mo te mahi i nga tauhohenga PCR teitei na te mea ka taea te whakahaere tonu me te iti o te wawaotanga a te tangata, na reira ka whakaiti i te wa e hiahiatia ana mo te tatūnga whakamatautau a-ringa me te whakanui ake i te maha o nga tauhohenga i roto i te waa kua whakaritea.

Te Whakapono, Te Maamaa me te Whakapumau Kounga o nga Kaihuri Ngaariki

I tua atu i te kaha o te mahi me te whakaurunga, me kaha ano te miihini PCR ki te tu atu ki etahi whakamahinga, te ahotea o te taiao, me nga tikanga tuku.Ko etahi o nga kaihanga ka ripoata me pehea te mahi a te taputapu i nga whakamatautau pono me te mauroa.Kei roto i te kitenga taputapu PCR e pa ana:

Te Whakapono: Ka whakamahia nga taputapu miihini ki te mahi i nga whakamatautau i runga i nga waahanga taputapu e whakamahia pinepine ana penei i nga tapoi waiariki, nga panui whakahaere / mata pa, me nga waahanga paihikara paihikara.

Te pehanga ambient: Ka taea te whakamahi i nga ruma taiao ki te whakataurite i nga ahuatanga rereke o nga whakamatautau o ia ra, penei i te mahana, te makuku.

Te Whakamatau Tukunga: Ka taea te whakamatautau i te wiri me te wiri i runga i nga paerewa o te International Safety Shipping Association hei whakarite kia tae mai te taputapu ki nga ahuatanga whakahaere kaore i pakaru.

He whakamana me te ratonga mo te pupuri i te miihini PCR

Ahakoa te kaha o te pono me te mauroa o te whakamatautau, kare e kore he take hangarau a nga kaieke waiariki mo te oranga o te taputapu.Mo te rangimarie o te ngakau, me whakaaro te whakamanatanga a te kaihanga, te ratonga, me te tiaki ina hoko taputapu.

Ko te ngawari o nga ratonga penei i te tiaki i runga i te waahi / hoki-ki-wheketere, nga ratonga aroturuki mamao, me nga taputapu whakakapi i roto i te tukanga tiaki, me etahi atu, hei whakaiti i te paanga ki te kaha o te mahi.

Te roa o te wa whakamana, te wa huri o te ratonga, te urunga o te tautoko hangarau, me nga pukenga o nga kaimahi tautoko ngaio.

Ka taea te whakauru taputapu, te mahi, te mahi tahi, me te manatoko ki te whakatutuki i nga taiwhanga me nga whakaritenga ture e pa ana.Ko nga ratonga tiaki penei i te manatoko o te pāmahana, te whakamatautau me te whakatikatika e waatea ana kia pai ai te mahi a te taputapu me nga tawhā e rite ana.

Hua e Pa ana: