I tata nei, ka kitea e au tetahi mea whakamiharo!He maha nga tohunga ngaio whakamatautau matatau ki a ia kaore i te mohio ki etahi tohu matauranga whakamatautau.

Hei tauira, ka taea e koe te whakautu i nga patai e whai ake nei?

He rereketanga kei waenga i te OD260 me te A260?He aha te tikanga o ia mea?
Ko te OD te whakapotonga o te kiato whatu (te kiato whatu), te A ko te whakapoto o te absorbance (absorbance), he rite tonu nga ariā e rua, ko te "optical density" he "absorbance", engari ko te "optical density" kei te rite ki te nuinga o nga paerewa a-motu me te mea kua whakatauritea ake.

Ko te tikanga ka inehia te uara OD i te 260nm hei tatau i te kukū waikawa karihi, na he aha te tohu 1OD?
Ko te waikawa nucleic he teitei o te whakaurunga i te roangaru o te 260nm, kei roto e rua te DNA me te RNA, me nga kongakonga waikawa nucleic pakaru (koinei te kaupapa matua).
Ko te uara OD i ine i te roangaru o te 260 nm i tuhia hei OD260.Mena he parakore te tauira, ka taea e te uara OD260 te tatau i te kukū o te tauira waikawa karihi.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (DNA whenu-rua)
=37 μg/ml ssDNA (ADN whenu-tahi)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
He hononga me te rereketanga i waenga i te RT-PCR, Realtime-PCR me QPCR?
He poto te RT-PCR mo te Whakamuri Whakamuri PCR
PCR Wā Tuturu=qPCR, he poto mo te PCR Wā Tuturu Ine
Ahakoa ko te PCR Wā Tuturu (te PCR ine ine-wa-tuuturu) me te PCR Whakamuri Whakamuri (whakamuri whakamuri PCR) te ahua nei ka whakapotohia hei RT-PCR.Engari ko te huihuinga o te ao: Ko te RT-PCR e pa ana ki te PCR whakawhiti whakamuri.

He aha nga nt, bp, me te kb e whakamahia ana hei whakaahua i te roa o te DNA/RNA i roto i te koiora?
nt = nucleotide
bp = turanga takirua turanga takirua
kb = kilobase

Ko te tikanga, ka kii koe he maha nga tangata kaore e aro ki enei korero iti!Ka mahia tenei e nga tangata katoa, kaore he tangata e ui ki a koe he aha tena.E mohio ana koe he koretake tenei, tika?

Kao, Kao, Kao, me tino mohio tenei!na tehea?
Na te mea e hiahia ana koe ki te tuku tuhinga!Tuakana!Ahakoa kei te whai koe ki te whakawhiwhi tohu, ki te whai i nga whakatutukitanga rangahau pūtaiao, me whakawhirinaki koe ki nga tuhinga hei korero!

Ko te tangohanga waikawa nucleic te mea tino ngawari me te tino whakamatautau.Ko te kounga o te tangohanga waikawa karihi ka whakatau tika i nga hua o nga whakamatautau ka whai ake.

Ahakoa kua maha au korero, he maha tonu nga hoa kare e aro.I tenei wa ka whakatau ahau ki te neke atu i te tuhinga!

Nga Momoohio iti mo te Whakaputa i nga Whakamatau PCR Waa-Tuturu Ine, e kiia ana ko MIQE, he huinga aratohu whakamatautau ine ine korikori i whakarewahia ki te ao, e whakatakoto ana i nga paerewa iti rawa mo nga korero whakamatautau e tika ana mo te arotake i nga whakamatautau PCR ine korakora me te whakaputa tuhinga.Na roto i nga tikanga whakamatautau me nga tikanga wetewete e whakaratohia ana e te kaiwhakamatautau, ka pai ake te arotake a nga kaiarotake i te mana o te kaupapa whakamatautau a te kairangahau.

Ka kitea i roto i te waahanga o te tangohanga waikawa karihi, ko nga mea e whai ake nei kua tohua,

Ko te "E" e whakaatu ana i nga korero e tika ana kia tukuna, ko "D" e tohu ana i nga korero me hoatu mehemea e tika ana.

He tino uaua te ahua, inaa, e hiahia ana ahau ki te kii me timata mai nga tangata katoa

te parakore (D), te tuku (D), te tapatahi (E) me te riterite (E) ki te arotake i nga waikawa Nucleic i enei waahanga e wha.

E ai ki nga tikanga whakamatautau, me korero tuatahi mo nga tikanga aromatawai o te ma me te kukume.

Ko te inenga OD te tikanga tino pai me te ngawari ki te rapu mo nga kaiwhakamatautau.Mo te kaupapa, kare au e korero korero ki konei.He maha nga taiwhanga inaianei e whakamahi ana i nga ira-a-roto-a-roto ki te tātari tika i nga tauira waikawa karihi.I a ia e whakaatu ana i te uara urunga, ka hoatu tika te hotaka i te uara kukū (waikawa nucleic, pūmua me te waikano korikori) me nga ōwehenga e pa ana.Mo te tātaritanga o te uara OD, Tiakina tenei pikitia ka pai koe.

Rarangi otinga uara OD ao

Heoi ano, he iti noa nga whakatupato me whakaputa motuhake maau.

(I muri i nga mea katoa, e mohio ana ahau me ko koe te hunga e penapena me te tatari kia hiahia koe!)

Note 1 Taputapu

Ko te uara OD ka pa ki nga taputapu rereke.I te mea kei roto te OD260 i tetahi awhe, ka whai kiko nga uara o OD230 me OD280.Hei tauira, ko te awhe absorbance o te Eppendorf D30 noa i te 260nm ko 0~3A, me te NanoDrop One of Thermo kei te 260nm.Te awhe absorbance o 0.5 ~ 62.5A.

Tuhipoka 2Reagent dilution

Ko te uara OD ka pa ki te waimehatanga o nga reagents rereke.Hei tauira, ko te panui OD260/280 o te RNA kua purea i te pH7.5 10mM TrisKo te parepare kei waenganui i te 1.9-2.1, i te wa kei rotowairewa wai kūpapaka iti ake te tauwehenga, pea ko te 1.8-2.0 anake, engari ehara tenei i te mea ka rerekee te kounga o te RNA.

Tuhipoka 3Matū toenga

Ko te noho o te toenga o nga matū ka pa ki te tika o te inenga waikawa karihi, na reira me karo i nga toenga o te pūmua, te phenol, te polysaccharide me te polyphenol i roto i nga tauira waikawa karihi ka taea.

Engari, ko te tikanga, ko te tangohanga me nga reagents organic he tikanga tawhito.I roto i nga kete arumoni, ka taea te whakatutuki i te paanga tangohanga ma roto i te pou whakaurunga-a-silica i honoa ki te centrifugation, te karo i nga reagents paitini me te kino he uaua ki te tango, me era atu. Ko te raru, penei i teKo te kete tangohanga waikawa karihi a Foregene, kaore e whakamahi i te DNase/RNase me nga reagents waro paitini puta noa i te mahi, tere me te haumaru., me tepānga kopai(i mea aitua he pakira, engari e mohio ana ahau kei te pirangi koe ki te mohio).

Tauira 1: Ko te hua tangohanga DNA genomic me te ma

Ko te Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) e rongoa ana i nga tauira oneone mai i nga maapuna rereke, a ko te nui me te parakore o te DNA ira tangata ka kitea i te ripanga e whai ake nei:
Tauira 2: Tissue RNA tangohanga hua me te ma

Ko te Kete Whakawehe RNA Tapeke Kararehe (RE-03012) i tukatuka i nga momo tauira kiko, a ka whakaatuhia te nui me te ma o te RNA i whiwhi ki te ripanga i raro nei (mo te kiko kiore):
Heoi, kaua e whakaaro kua oti koe i te uara OD.Kei a koe te tiaki i nga kaupapa matua i tuhia e au mo koe i mua?

Panui

Ka tatauhia hoki nga ngota ngota waikawa nucleic i roto i te whakaurunga.Ki te whakaaro kei a koe nga toenga DNA genomic i roto i te RNA, ka ahua teitei to uara OD, engari kaore e taea te whakatau i te tino kukū o te RNA.Ahakoa ko to RNA Kaore i te maarama mena he whakahekenga, no reira me whai tikanga arotakenga matawhānui kia tika ake te whakatau, ara, te arotakenga tika o te waikawa nucleic i whakahuahia i MIQE.