Tohutohu mo te Whakapai ake i te Whakaora Kapia

1. Whakanuia te kawenga tauira i te wa o te electrophoresis.

2. Whakamahia te parapara hiko hou kua rite.

3. I te wa e tapahi ana i te kāpia, ngana ki te tapahi anake i te kāpia ki nga takai hei whakaiti i te rahi o te tapahi kāpia: kaua e hiahia ki te kopia me etahi wahanga kaupapa, ki te kore ka pa ki te tere whakaora.

4. I muri i te whakarewanga o te kapia e rua, neke atu ranei, whakamahia he ngongo ahakoa te nui o te rōrahi ka whakawhiti ki te pou kotahi.

5. Ko te otinga i whakauruhia ki roto i te sol ka taea te iti ake, he pai ake ki te here o te DNA ki te membrane, engari ko te tikanga kaore e neke atu i te 750ul.

6. Ko te mea matua ki te whakaora i te ra ko te here i te DNA ki te poupou na roto i te kukū o te tote, te waikawa (te utu) me te hydrophobicity o te otinga i roto i te pou.No reira, ki te mea he tiketike rawa te pH o te paera electrophoresis, ka taea te taapiri 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) ki te sol;kia pai ake ai te haukoti i nga ngota ngota DNA i runga i te kiriuhi, ka taea te taapiri i te 30% isopropanol ki te wera ki te wai i muri i te whakakorenga o te kapia.

7. I mua i te tāpiritanga o te eluent, waiho te tīwae i te pāmahana rūma mō ētahi meneti (tata ki te 10 meneti) kia tino whakaeto te waihā.

8. Hei whakamutunga, taapirihia he iti ake te maamaa hei whakaiti i te rōrahi whakaora.Ko te tikanga, ko te 30-50μl eluent e whakamahia ana mo te elution (kaore i te iti rawa, mena kaore e taea te whakamakuku i te membrane, kaore i te pai ki te elution);kei te waenganui o te kirikiri nga topata elution, ki te whakakore i te DNA kua herea ki te kiriuhi.

9. I muri i te whakauru i te eluent, ka taea te whakakore i roto i te pati wai o te 55 nga nekehanga mo nga meneti 5, ka waiho ranei ki roto i te pati wai o te 50 nga nekehanga mo te neke atu i te 10 meneti, ka hirihia ranei ki te parafilm i nga nekehanga 4 i te po, katahi ka centrifuged mo te whakaora i te ra i muri mai, he pai te painga.

10. Tāpirihia te ruate kua whakahiatohia ki te tīwae whakauru me te centrifuge ano.

Nga tikanga me nga tikanga mo te whakaora hua PCR

1. Hangarua rapa noa

Mena kei te hiahia koe ki te whakaora i te kapia, he pai ake te whakamahi i te kete, he watea, he iti ake te tere o te whakaora.Mena ka tino hiahia koe ki te whakaora i te ringa, ka taea e koe te taapiri kia 3 nga wa te nui o te TE i muri i te tapahi i te kāpia.Whai muri i te rewa i roto i te pati wai, ka tangohia ma te phenol, phenol/chloroform, ka tohe te waihano.Koia tena.

2. Te whakaora i te DNA mai i nga reera rewa iti

Te purenga o nga Mahinga DNA Tāpirihia te TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) kia rite ki te rōrahi o te rā, ka waiho ki roto i te kaukau wai 65°C mo te 5 meneti kia memeha katoa te reera.

Whai muri i te kawe ki te pāmahana rūma, he rite te nui o te phenol (kua kukū ki te TE, TE i hiritia ki te paparanga o runga, ka tangohia te paparanga o raro o te phenol) ka tapirihia, ka ata konatunatua te ranunga (kaore he ranu), ka centrifuge i te 12,000 rpm mo te 3 meneti.Whakahokia kia 1-2 nga wa.

Tangohia te haupapa, tāpirihia te 0.1 rōrahi o te 3mol/L konutai acetate (pH 5.2) me te 2.5 nga wa rōrahi o te waihā pūmau hei kawe i te rerenga waihā.Wewetehia te DNA kua purea me te nui o te TE, ine i te ihirangi, me te whakarite mo te whakamahi (ka taea te whakamahi mo te tātari hanganga ira, te whakarite tirotiro, me etahi atu).

3. Whakaora PCR me te tino whakakaha pai

Mena he pai te motuhake o te whakakaha PCR, he purenga noa me te whakaora i te hua PCR.Ka taea e koe te taapiri i te 50ug/ml proteinase K ki te hua PCR, 37 nga nekehanga mo te 1h, kotahi te tango ki te phenol/chloroform, kotahi te tango ki te chloroform, me te taapiri i te 0.1 rōrahi o te supernatant.Ko te konutai acetate i whakahokia mai e te rerenga me te 2.5 pukapuka o te waihano tino.

Hua e pā ana:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/