He aha te kano kano mRNA
Ka tukuna e te kano kano mRNA te RNA ki nga ruma o te tinana ki te whakaputa me te whakaputa i nga antigens pūmua i muri i nga whakarereketanga e tika ana i roto i te vitro, na reira ka arahi te tinana ki te whakaputa urupare mate ki te antigen, na reira ka whakawhānui ake te kaha o te tinana.[1,3].
Whakaahua 1: Hoahoa hoahoa o te paanga o te werohanga tika o te kano kano mRNA [2]
Te whakarōpūtanga o nga kano kano mRNA
Kua wehea nga kano kano mRNA kia rua nga momo:kore tukuruamRNA mewhakakaha akemRNA: ko te mRNA te whakanui ake i a ia ano ehara i te whakawaehere noa i te antigen whaainga, engari ka whakawaehere ano hoki i te tukurua e taea ai te whakakaha RNA intracellular me te tikanga whakaputa pūmua.Ko nga kano kano mRNA kore-whakaritea ka whakawaehere noa i nga antigens kua whakaritea, kei roto nga rohe 5'a 3'kare i whakamaoritia (UTR).Ka whakarato ratou i te whakaongaonga matawhānui o te urutau me te mate mate o roto, ara ko te whakaaturanga antigen in situ me te tuku tohu morearea, me nga tono e whai ake nei.[2,3]
●Ka taea te whakarato i te whakaongaonga matawhānui o te urutau me te aukati o roto, ara ko te whakaaturanga antigen in situ me te tuku tohu morearea
●Ka taea te whakakorikori i te urupare mate "tautika", tae atu ki te whakakatakata me te whakangao pūtau me te mahara aukati
●Ka taea te whakakotahi i nga momo antigens me te kore e piki ake te uaua o te hanga kano kano
●Ka taea te whakapai tonu i te kaha aukati ma te kano kano kano, karekau he iti, iti ranei te urupare mate ki te kaikawe
●Ka taea e nga kano kano mRNA pumau te whakamahana te kawe me te rokiroki o nga kano kano
Whakaahua 2: Te hoahoa hoahoa o te kano kano mRNA me tona tikanga whakaputa antigen [4]
Nga ahuatanga o nga kano kano mRNA
Ka whakatauritea ki nga kano kano tuku iho, ko nga kano kano mRNA he tikanga hanga ngawari, he tere te whanaketanga, kaore he hiahia mo te ahurea pūtau, me te utu iti.Ka whakatauritea ki nga kano kano DNA, kaore nga kano kano mRNA me uru ki roto i te karihi me te kore he tupono ki te whakauru ki roto i te momo ira tangata.Ko te haurua o te ora ka taea te whakatika ma te whakarereke.
Ripanga 1: Nga painga me nga huakore o nga kano kano mRNA
|
| Painga | Te ngoikoretanga |
| kano kano mRNA | Te rangahau tere me te whakawhanaketanga, ka 40 ra te mahi kano kano | Whakaohohia he urupare aukati kore
|
| Ko te koretake o te mRNA i raro i nga tikanga whaiaroaro, he ngawari ki te whakaheke | E kore e uru ki roto i te momo ira hei karo i nga huringa whakaora
| |
| Kaore e hiahiatia he tohu tohu karihi, he tuhi | Ko te whai huatanga o te karihi haumaru ka noho tonu hei manatoko
|
Whakaaturanga 3: Te tūtohi rerenga o te hanga me te whakarite kano kano mRNA [4]
Foregene Viral RNA Isolation kete
RT-qPCR ngawari (Kotahi Hipanga)
Nga rautaki pai ake mo te whakarite kano kano mRNA
Na te ngoikore o te mRNA ake, he ngawari te paheketanga e nga karihi i roto i nga kopa, he iti te kaha o te urunga o nga pūtau, me te iti o te whakamaoritanga, ka whakawhāitihia e enei hapa te tono kano kano mRNA.He mea tino nui ano te mahi whakamaoritanga.Ka taea te wehewehe i nga waka tuku ki nga vectors viral me nga vectors kore-viral (tae atu ki nga liposomes, non-liposomes, viruses, nanoparticles, etc.).No reira, me whai tikanga whakapai ake.E whai ake nei he rautaki whakapai rongoa mo te whakarite mRNA[2]
1 Te whakahiato i nga tairitenga potae, te whakamahi ranei i nga whākōkī kapi hei whakaū i te mRNA me te whakanui i te whakamaori pūmua mā te here ki te tauwehe whakamaoritanga whakamaori eukaryotic 4E (EIF4E)
2 Whakaritea nga huānga o te rohe 5′-kaore i whakamaoritia (UTR) me te 3′-UTR hei whakapumau i te mRNA me te whakanui i te whakamaoritanga pūmua.
3 Ko te taapiri i te hiku Poly(A) ka taea te whakapumau i te mRNA me te whakanui i te whakamaoritanga pūmua
4 Ko nga nucleosides kua whakarereketia hei whakaiti i te whakahohenga aukati mate me te whakanui i te whakamaoritanga
5 Ko te maimoatanga me te RNase III me te purenga tere pūmua wai chromatography (FPLC) ka taea te whakaiti i te whakahohenga aukati me te whakanui i te whakamaoritanga
6 Arotauhia nga raupapa me nga tohu hei whakanui ake i te whakamaoritanga
7 Te tuku-tahi o nga take whakamaoritanga whakamaori me etahi atu tikanga hei whakarereke i te whakamaoritanga me te immunogenicity
Whakaaturanga 4: In vitro transcription (IVT) hanga mRNA me te tukanga huihuinga [5]
Whakaritenga nui-nui o te DNA plasmid
Ko te purenga DNA Plasmid te nuinga ka tango i nga mea poke penei i te RNA, te endotoxin DNA porowhita tuwhera, te pūmua manaaki me te waikawa nucleic host, me te nuinga o te wa ka huri te plasmid recombinant ki te E. coli.Ko te E. coli ka pa ki te fermentation teitei, katahi te wehenga totoka-wai, me te kohinga o te E. coli.Ko te E. coli ka tukuna ki te lysis alkaline, te wehenga totoka-wai centrifugal me te whakamarama microfiltration i muri i te lysis, te ultrafiltration me te kukū i muri i te whakamarama, katahi ka purea chromatographic.
Te purenga o te DNA plasmid:
Foregene General Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016(05):446-449.
【2】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, et al.kano kano mRNA - he wa hou i roto i te kano kano[J].Nga Tirohanga Taiao Te Whakakitenga Taauau, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Introduction to RNA Vaccines.In: Kramps T., Elbers K. (eds) RNA Vaccines.Tikanga i roto i te Molecular Biology, vol 1499. Humana Press, New York, NY.
【4】Maruggi G , Zhang C , Li J , et al.Ko te mRNA hei Hangarau Whakawhiti mo te Whakawhanaketanga Kano Kano ki te Whakahaere i nga mate hopuhopu[J].Whakapakari Molecular, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, ,Tailoring mRNA Vaccine to Balance Innate/Adaptive Immune Response, Trends in Molecular Medicine,Volume 26, Putanga 3,2020,Whārangi 311-323.
Wā tuku: Akuhata-05-2021
