Ko te PCR Wā Tuturu, e mohiotia ana ko te PCR ine, ko te qPCR ranei, he tikanga mo te aro turuki me te tātari i nga hua whakakaha PCR.
Na te mea ko te PCR ine ine nga painga o te mahi ngawari, tere me te watea, te aro nui, te pai o te tukurua, me te iti o te parapara, ka whakamahia nuitia i roto i nga whakamatautau hauora, te aromatawai i te kaha o te raau taero, te rangahau whakaaturanga ira, te rangahau transgenic, te kitenga ira, te kimi pathogen, te kimi kararehe me te tipu., whakamatautau kai me etahi atu mara.
No reira, ahakoa kei te mahi koe i nga rangahau taketake i roto i nga mahi rangahau ora, i nga kaimahi ranei o nga kamupene rongoa, nga kamupene whangai kararehe, nga kamupene kai, me nga kaimahi o te tirotiro urunga-whakaputa me nga tari taratahi, nga tari tirotiro taiao, nga hohipera me etahi atu waahanga, ka nui ake, ka iti ake ranei koe ki te mohio ki te mohio ki te whakahaere PCR ine.

Te Tikanga mo te PCR Wā Tuturu

Ko te PCR Wā Tuturu he tikanga e honoa atu ai nga matū korikori ki te punaha tauhohenga PCR, a, ko te kaha o te tohu rewharewha i roto i te tukanga o te tauhohenga PCR ka aro turukihia i te waa tuturu e te taputapu PCR ine, ka mutu ka tātarihia, ka tukatukahia nga raraunga whakamatautau.

【Te ānau whakakaha】Ko te ānau e whakaatu ana i te tukanga hihiri o te PCR.Ko te anau whakakaha o te PCR ehara i te mea he ananga taupuke paerewa, engari he anau sigmoid.

[Wāhanga pūhara o te ānau whakakaha]Na te pikinga o te maha o nga huringa PCR, te korenga o te DNA polymerase, te whakahekenga o nga dNTP me nga primers, me te aukati i te tauhohenga whakahiato e te tauhohenga a-hua o te pyrophosphate, me etahi atu, kaore te PCR i nga wa katoa e toro haere., ka mutu ka uru ki te paparahi.

[Rohe Tipu Tiputanga o te Anau Whakanui]Ahakoa he rereke te rerekee o te wahanga paparahi, i roto i tetahi rohe o te rohe tipu taupuke o te pihi whakakaha, he tino pai te tukurua, he mea tino nui mo te tātari ine o te PCR.

[Uara paepae me te uara Ct]Ka whakatauhia e matou te uara tepe o te kitenga o te rewharewha ki te tuunga e tika ana i roto i te waahi tipu taupuke o te pihi whakakaha, ara ko te uara paepae (Taupae).Ko te whakawhitinga o te uara paepae me te kurupae whakakaha ko te uara Ct, ara, ko te uara Ct e tohu ana ki te maha o nga huringa (Porohanga Paepae) ka eke ki te uara paepae.

Ko te kauwhata i raro nei e whakaatu marama ana i te hononga i waenga i te raina paepae me te anau whakakaha, te paepae me te uara Ct.

【Me pehea te ine?】

Kua whakamatauria e te ariā pangarau he hononga ahorangi kōaro te uara Ct me te taukohiko o te maha o nga tauira tuatahi.Ka aro turukihia e te PCR Waa Tuturu nga hua whakakaha PCR i roto i te waa tuuturu me te ine i a raatau i roto i te waahanga whakahiatotanga.

Mo ia huringa o te PCR, ka piki ake te DNA ma te 2 nga wa, katahi ka tae ki te paparahi.

Ki te whakaaro ko te nui o te DNA timata ko A₀ , i muri i nga huringa n, ka taea te whakaatu te nui o te hua DNA hei:

A _n =A ₀ ×2ⁿ

Na, ka nui ake te nui o te DNA tuatahi A 0, ko te tere ake o te nui o te hua kua whakanuia ka tae ki te uara kitenga An , me te maha o nga huringa ka tae ki An ko te uara Ct.Arā, ka nui ake te rahi o te DNA tuatahi A 0, ka piki ake te pihinga whakakaha ake, me te mea he iti ake te maha o nga huringa n.

Ka mahia e matou te waimehatanga rōnaki o te paerewa o te kukū e mohiotia ana, ka whakamahia hei tauira mo te PCR Wā Tuturu, ka riro mai he raupapa o nga pihi whakakaha i nga wa rite i roto i te raupapa o te timata i te nui o te DNA mai i te nui ake ki te iti.E ai ki te hononga raina i waenga i te uara Ct me te hautaka o te maha o nga tauira timatanga, aKa taea te hanga [anau paerewa] .

Ma te whakakapi i te uara Ct o te tauira me te kukū e kore e mohiotia ki roto i te ānau paerewa, ka taea te whiwhi i te rahinga tauira tuatahi o te tauira me te kukū e kore e mohiotia, koinei te kaupapa ine o te PCR Wā Tuturu.

Tikanga rapu mo te PCR Wā Tuturu

Ka kitea e te PCR Wā Tuturu nga hua whakakaha PCR ma te kite i te kaha o te rewharewha i roto i te punaha tauhohenga.

Te Tikanga Whakamaunga Waikano Korekore】

Ko nga waikano rewharewha, penei i te TB Green ® , ka taea te here kore motuhake ki te DNA paerua-rua i roto i nga punaha PCR me te rere i runga i te here.

Ko te kaha o te rewharewha i roto i te punaha tauhohenga ka piki ake i te pikinga o nga huringa PCR.Ma te kite i te kaha o te rewharewha, ka taea te aro turuki i te nui o te whakakaha DNA i roto i te punaha tauhohenga i roto i te waa, katahi ka taea te whakatau whakamuri te nui o te tauira timata i roto i te tauira.

【Te kaupapa o te tikanga rangahau kareoro】

te rangahau kareorohe raupapa waikawa karihi me te roopu kareoro i te pito 5′ me te roopu tinei i te pito 3′, ka taea te here ki te tauira.I te wa e mau tonu ana te rangahau, ka tineia te rewharewha e tukuna ana e te fluorophore e te roopu tinei ka kore e taea te rere.I te wa e tihorea ana te rangahau, ka wehe te matū korikori ka puta te korakora.

Ka taapirihia he rangahau rewharewha ki te otinga tauhohenga PCR.I te wa o te mahi whakaene, ka herea te rangahau kareoro ki te waahi motuhake o te tauira.I roto i te tukanga toronga, ka taea e te mahi exonuclease 5′→3′ o te whākōkī PCR te whakakorikori i te rangahau korikori kua ranuhia ki te tauira, ka wehea te matū korikori ki te whakaputa korikori.Ma te kite i te kaha o te rewharewha o te rangahau i roto i te punaha tauhohenga, ka tutuki te kaupapa o te aro turuki i te nui o te whakakaha o te hua PCR.

【Te Kowhiringa o te Tikanga Tirohanga Tirohanga】

Mena ka whakamahia ki te wehewehe i nga raupapa me te homology teitei me te mahi i nga kitenga PCR maha penei i te tātari patopato SNP, kaore e taea te whakakapi i te tikanga tirotiro kareoro.
Mo etahi atu whakamatautau PCR Wa Tuturu, ka taea te whakamahi i te tikanga chimera fluorescent ngawari, ngawari me te utu iti.

probesTe tino motuhake, ka taea te PCR maha

Te ngoikoretanga

Nga whakaritenga motuhake teitei mo te whakanui;

e kore e taea te mahi PCR maha. Me hoahoa he rangahau motuhake, he utu nui;

i etahi wa he uaua te hoahoa rangahau

Hua e Pa ana: