Karekau he tohu whakakaha

1.Ko te Taq DNA Polymerase i roto i te kete ka ngaro tana mahi na te hee o te rokiroki, te paunga ranei o te kete.
Taunakitanga: Whakapumautia nga tikanga rokiroki o te kete;tāpirihia te rahinga tika o te Taq DNA Polymerase ki te punaha PCR, ki te hoko ranei i tetahi Kete PCR Waa Tuturu hou mo nga whakamatautau e pa ana.

2.He maha nga aukati o Taq DNA Polymerase i roto i te tauira DNA.
Huatau: Whakapaihia te tauira, whakaitihia ranei te nui o te tauira i whakamahia.

3.Ko te kukū Mg2+ e kore e pai.
Taunakitanga: Ko te kukū Mg2+ o te2× Real PCR Mix e whakaratohia ana e matou he 3.5mM.Heoi, mo etahi o nga timatanga me nga tauira motuhake, ka nui ake pea te kukume Mg2+.Na reira, ka taea e koe te taapiri tika i te MgCl2 ki te arotau i te kukū Mg2+.E taunaki ana kia whakanuia te Mg2+ 0.5mM ia wa mo te arotautanga.

4.Ko nga tikanga whakakaha PCR kaore i te pai, a ko te raupapa tuatahi, te kukū ranei he he.
Huatau: whakaū i te tika o te raupapa tuatahi me te mea kaore ano kia whakahekehia te tuatahi;ki te kore e pai te tohu whakakaha, me ngana ki te whakaheke i te pāmahana whakaene me te whakatika tika i te kukū tuatahi.

5.He iti rawa, he nui rawa ranei te nui o te tauira.
Taunakitanga: Whakahaerehia te waimehatanga rōnaki raina tauira, ka kowhiri i te kukū tauira me te painga PCR pai rawa atu mo te whakamatautau PCR Wā Tuturu.

He tiketike rawa te uara o te NTC

1.Reagent contamination meinga i roto i te mahi.
Taunakitanga: Whakakapihia ki nga reagents hou mo nga whakamatautau PCR Wā Tuturu.

2.I puta te poke i te wa e whakarite ana te punaha tauhohenga PCR.
Taunakitanga: Me whai tikanga whakamarumaru i te wa e mahi ana, penei: te mau karapu taherapa, te whakamahi i te pito paipa me te tātari, aha atu.

3.Ko nga mea tuatahi ka whakahekehia, a, ko te whakahekenga o nga mea tuatahi ka nui ake te kaha kore-motuhake.
Huatau: Whakamahia te SDS-PAGE electrophoresis ki te kite mena kua whakahekehia nga mea tuatahi, ka whakakapi ki nga mea tuatahi hou mo nga whakamatautau PCR Wā Tuturu.

Dimer tuatahi, te whakakaha kore-motuhake ranei

1.Kare i te pai te kukū Mg2+.
Taunakitanga: Ko te kukū Mg2+ o te 2× Real PCR EasyTM Mix e whakaratohia ana e matou he 3.5 mM.Heoi, mo etahi o nga timatanga me nga tauira motuhake, ka nui ake pea te kukume Mg2+.Na reira, ka taea e koe te taapiri tika i te MgCl2 ki te arotau i te kukū Mg2+.E taunaki ana kia whakanuia te Mg2+ 0.5mM ia wa mo te arotautanga.

2.He iti rawa te paanga o te PCR annealing.
Huatau: Whakanuia te paemahana whakamahana PCR ki te 1 ℃ ki te 2 ℃ ia wa.

3.He roa rawa te hua PCR.
Taunakitanga: Me noho te roa o te hua PCR Wā Tuturu i waenga i te 100-150bp, kaua e neke ake i te 500bp.

4.Ka whakahekehia nga mea tuatahi, a, ko te whakahekenga o nga waahanga tuatahi ka arahina ki te ahua o te whakanui motuhake.
Huatau: Whakamahia te SDS-PAGE electrophoresis ki te kite mena kua whakahekehia nga mea tuatahi, ka whakakapi ki nga mea tuatahi hou mo nga whakamatautau PCR Wā Tuturu.

5.He kino te punaha PCR, he iti rawa ranei te punaha.
Huatau: He iti rawa te punaha tauhohenga PCR ka heke te tika o te kitenga.He pai ake te whakamahi i te punaha tauhohenga e taunakihia ana e te taputapu PCR ine hei whakahaere ano i te whakamatautau PCR Wā Tuturu.

He kino te tukurua o nga uara ine

1.Kei te kino te taputapu.
Huatau: He hapa pea kei waenganui i ia kohao PCR o te taputapu, ka hua te kore e taea te whakaputa i te wa e whakahaere ana te pāmahana, e kitea ana ranei.Tena koa tirohia kia rite ki nga tohutohu o te taputapu e pa ana.

2.Ko te tauira pokekore kaore i te pai.
Taunakitanga: Ko nga tauira poke ka arai i te koretake o te whakaputanga o te whakamatautau, kei roto ko te parakore o te tauira me nga mea tuatahi.He pai ake te pure i te tauira, a ko nga mea tuatahi ka purea e te SDS-PAGE.

3.He roa rawa te whakaritenga o te punaha PCR me te wa rokiroki.
Huatau: Whakamahia te punaha PCR Wā Tuturu mo te whakamatautau PCR i muri tonu i te whakaritenga, kaua hoki e waiho kia roa rawa.

4.Ko nga tikanga whakakaha PCR kaore i te pai, a ko te raupapa tuatahi, te kukū ranei he he.
Huatau: whakaū i te tika o te raupapa tuatahi me te mea kaore ano kia whakahekehia te tuatahi;ki te kore e pai te tohu whakakaha, me ngana ki te whakaheke i te pāmahana whakaene me te whakatika tika i te kukū tuatahi.

5.He kino te punaha PCR, he iti rawa ranei te punaha.
Huatau: He iti rawa te punaha tauhohenga PCR ka heke te tika o te kitenga.He pai ake te whakamahi i te punaha tauhohenga e taunakihia ana e te taputapu PCR ine hei whakahaere ano i te whakamatautau PCR Wā Tuturu.