• facebook
  • hono
  • youtube

E whakapono ana ahau ka raru nga tangata katoa i nga raru penei, penei ranei i te wa e mahi ana i nga tauhohenga PCR, engari ko te nuinga ka taea te whakarōpūtia ki nga raru nui e rua:

He iti rawa te whakakaha o te tauira ira (whakanui);
He nui rawa te whakakaha ira ira-kore.
Ko te whakamahi i nga taapiri tetahi o nga rautaki noa hei whakaoti i enei raru.I te nuinga o te waa ko te mahi a nga taapiri e rua nga waahanga:
hanganga tuaruao nga ira (hanganga tuarua);
Whakaitihia te priming kore-motuhake.
I tenei ra, ka whakaatu poto te etita ki a koe i nga taapiri noa i roto i nga tauhohenga PCR me o raatau mahi.
Nga taapiri e whakaiti ana i te hanganga tuarua
sulfoxide(DMSO)
tauira irame te ihirangi GC teitei.Heoi, ka tino whakaitihia e DMSO nga mahi polymerase Taq.No reira, me whakataurite te katoa i te urunga tauira me te mahi o te polymerase.E kii ana te ētita ka taea e koe te whakamatau i nga momo kukū o DSMO, penei i te 2% ki te 10%, ki te kimi i te kukū e pai ana ki to whakamatautau.
Ko nga hopi katote kore
Ko nga mea horoi kore-katote, penei i te 0.1-1% Triton X-100, Tween 20, NP-40 ranei, i te nuinga o te waa ka whakaiti i te hanganga tuarua o te DNA.Ahakoa ka taea e tenei te whakanui ake i te ira tauira, ka raru ano te whakakaha kore-motuhake.Na, he pai te mahi o enei taapiri mo nga tauhohenga PCR iti-hua kaore he para, engari kaore i te pai mo nga tauhohenga PRC ahua poke.Ko tetahi atu painga o nga katote kore-katote ko te whakahekenga o te poke SDS.I te nuinga o te wa i te wa o te tangohanga DNA, ka kawea te SDS ki te taahiraa PCR, ka tino aukati i te mahi o te polymerase.Na reira, ko te taapiri i te 0.5% Tween-20 or Tween-40 ki te tauhohenga ka taea te whakakore i nga hua kino o te SDS.
Betaine_
Ka taea e Betaine te whakapai ake i te whakakaha DNA ma te whakaiti i te hanganga hanganga tuarua me te tikanga he "mea ngaro" te taapiri ki nga kete PCR arumoni.Mena kei te pirangi koe ki te whakamahi i te betaine, me hoatu e koe te betaine, te betaine mono-hydrate ranei (Betaine, te Betaine mono-hydrate), engari kaua te betaine hydrochloride (Betaine HCl), whakatika ki te kukū whakamutunga o te 1-1.7M.Ka taea hoki e Betaine te whakapai ake i te motuhake na te mea ka whakakorehia te ti'aturi o te hanganga takirua o te whakarewatanga o te DNA/te whakahekenga DNA.
Ko nga taapiri hei whakaiti i te parani kore-motuhake
Formamide
Ko te Formamide he taapiri PCR pararopi e whakamahia ana.Ka taea e ia te whakakotahi me te riu nui me te riu iti i roto i te DNA, na reira ka whakaiti i te pumau o te DNA matua toka rua me te whakaheke i te pāmahana rewa o te DNA.Ko te kukū o te formamide e whakamahia ana i roto i nga whakamatautau PCR he 1%-5%.
Tetramethylhaukinia pūhaumāota( TMAC)
Ka taea e Tetramethylammonium chloride te whakanui ake i te motuhake o te whakakotahitanga (te motuhake o te whakakotahitanga) me te whakanui ake i te pāmahana rewa o te DNA.No reira, ka taea e te TMAC te tango i nga tohu kore-motuhake me te whakaiti i te herekore o te DNA me te RNA.Mena ka whakamahi koenga timatanga whakahekei roto i te tauhohenga PCR, mahara ki te taapiri i te TMAC, e whakamahia nuitia ana i te kukū o te 15-100mM.
Ko etahi atu taapiri noa
I tua atu i nga waahanga e rua o nga taapiri kua whakahuahia i runga ake nei, he maha nga taapiri noa i roto i nga tauhohenga PCR, ahakoa he rereke nga mahi, he mea nui ano hoki.
Katote konupora
Ko te katote konupora he cofactor (cofactor) o te polymerase, ara, ki te kore he katote konupora, ka kore te polymerase e mahi.Heoi, he nui rawa nga katote konupora ka pa ki te kaha o te polymerase.Ka rereke te kukū o nga katote konupora i ia tauhohenga PCR.Ko nga maatete chelating (pēnei i te EDTA me te citrate), ko te kukū o nga dNTP me nga pūmua ka pa katoa ki te kukū o nga katote konupora.Na, ki te raru koe ki to whakamatautau PCR, ka taea e koe te huri i nga momo katote konupora konupora, hei tauira, mai i te 1.0 ki te 4.0mM, me te waahi o te 0.5-1mM i waenganui.
Me mahara ko te maha o nga huringa whakatio-rewa ka arahi ki te whakaroputanga o te wairewa konupora chloride.No reira, me tino whakakorea e koe i mua i ia whakamahinga, ka uru pai i mua i te whakamahi.
Bovine serum albumin(Bovine albumin, BSA)
I roto i nga whakamatautau matū matū, ko te albumin serum bovine he taapiri noa, ina koa i roto i te aukati i te nakunaku matū me te PCR.I roto i nga tauhohenga PCR, he awhina te BSA ki te whakaheke i nga mea poke penei i nga pūhui phenolic.A e kiia ana hoki ka taea te whakaiti i te piri o nga tauhohenga ki te pakitara o te ipuipu.I roto i te tauhohenga PCR, ko te nuinga o te wa ka eke te kukū o te BSA kua tapirihia ki te 0.8 mg/ml.
 
Hua e Pa ana:
PCR Hero(me te tae)
PCR Hero


Wā tuku: Feb-10-2023