Tiu Kararehe Tika PCR kete-UNG (kaore he Utauta Tauira) Kawa
Whakaahuatanga kete:
Whakamahi tika i te lysate kikokiko kararehe hei tauira mo te whakakaha PCR, kaore he tangohanga motuhake o te DNA, he tere me te tairongo teitei.Kua taapirihia te punaha anti-parahanga UNG ki te whakakore i nga hua pai.
◮Kaore e hiahiatia te purenga DNA e pau ana te wa me te utu nui.
◮He iti te tono tauira, me tango he kakano kotahi.
◮Kaore e hiahiatia nga maimoatanga motuhake penei i te huri me te kuru, a he ngawari te mahi.
◮Ko te punaha PCR kua arotauhia ka taea e te PCR te whai kiko ake me te kaha ake o te manawanui ki nga aukati tauhohenga PCR.
Whakaahuatanga
Ka whakamahia e tenei kete he punaha paatete lysis motuhake hei tuku tere i te DNA ira mai i nga tauira kiko kararehe mo nga tauhohenga PCR, no reira he tino pai mo te whakamatautau ira-nui.
Ko te tukanga o te tuku i te DNA genomic mai i te lysis buffer ka oti i roto i te 10-30 meneti i te 65°C.Karekau he tukanga pera i te tango i te pūmua me te tango RNA, ka taea te whakamahi i te tohu DNA hei tauira mo te tauhohenga PCR.
2×PCR ngawariTMWhakaranu (UNG) whakamahi dUTP hei utu mo te dTTP i runga i te 2×PCR EasyTMWhakaranuhia, ka taapirihia te UNG enzyme (Uracil-N-glycosylase) ka taea te whakaheke i te tauira kei roto te dUTP i te wa ano.I mua i te tauhohenga PCR, ka whakamahia te enzyme UNG ki te whakaheke i te hua PCR kei roto te uracil.Karekau he paanga o te UNG enzyme ki te tauira karekau he uracil, ma reira ka whakarite i te motuhake me te tika o te whakanui me te aukati i te tupono o nga hua PCR i te wa e whakamatautauria ana te ira nui.
Ko te D-Taq DNA polymerase he DNA polymerase i hangaia e Foregene mo nga tauhohenga PCR tika.Ko te D-Taq DNA polymerase he kaha te manawanui ki nga momo aukati tauhohenga PCR, a ka taea e ia te whakanui i nga tohu o te DNA i roto i nga momo punaha tauhohenga uaua, a ka eke te tere whakakaha ki te 2Kb/min, he mea tino pai mo te tauhohenga PCR Tika.
Nga waahanga kete
| Wāhanga I | Kaipupuri AL |
| Foregene Protease | |
| 6× DNA Loading Buffer | |
| Wahi II | 2×PCR ngawariTMWhakaranu(UNG) |
Nga waahanga me nga painga
■Karekau he purenga DNA e pau ana te wa me te utu
■ He iti te tono tauira, he iti rawa te 5mg te kiko kararehe ka taea te whakamatautau.
■ Kaore e hiahiatia he maimoatanga motuhake penei i te huri me te kuru, a he ngawari te mahi.
■ Hangaia e te punaha PCR kua arotauhia te ahua o te PCR me te kaha ake o te manawanui ki nga aukati tauhohenga PCR.
■ Pūnaha PCR anti-parahanga 2×PCR ngawariTMWhakakotahitia (UNG) te whakakore i te parahanga i puta mai i nga hua PCR me te whakarite i te motuhake me te tika o te whakakaha.
Tawhā kete
Taupānga: he momo momo kopa kararehe.
Ko te DNA i tukuna mai i te tauira lysis: whakamahia anake hei tauira PCR.
Ka taea te whakamahi i te kete mo nga kaupapa e whai ake nei: te tautuhi i te transgenosis, te whakapapa kararehe, aha atu.
Te rere mahi
Rokiroki me te ora o te Papa
Ko te wahanga I o tenei kete me penapena ki te 2-8℃.
Ko te reagent Buffer AL ka taea te penapena mo nga marama 12 i raro i nga waahi maroke;ka taea te penapena i te 2-8℃mo te rokiroki roa.
He tātai ahurei tā Reagent Foregene Protease.Hei whakarite i tana mahi me te pumau, tiakina ki te 4℃mo te 12 marama.
Reagent 6×Ka taea te penapena DNA Loading Buffer ki te 4℃ranei -20℃mo te wa roa.
Ko te wahanga II o tenei kete me pupuri ki te -20℃.
Reagent 2×PCR ngawariTMWhakaranu(UNG), mena ka whakamahia auau, ka taea hoki te penapena ki te 4℃mo te rokiroki mo te wa poto (whakamahia i roto i nga ra 10).
