Puka Uwau/Kari FTA Kete Wetewete DNA Te Tangohanga DNA Genomic, Kete Purifiaction ranei mai i Buccal Swabs
Whakaahuatanga kete:
Kia tere te pure i te DNA genomic-kounga teitei mai i nga tauira o te Kari kaukau/FTA.
◮Karekau he poke RNase:Ko te Tiwae DNA-anake e whakaratohia ana e te kete ka taea te tango i te RNA mai i te DNA genomic me te kore e taapiri i te RNase i te wa o te whakamatautau, kia kore ai e poke te taiwhanga e te RNase o waho.
◮Tere tere:He nui ake te mahi a Foregene Protease i nga momo porotease rite, a ka keri tere i nga tauira kiko;he ngawari te mahi, a ka taea te mahi tangohanga DNA genomic i roto i nga meneti 20-80.
◮Watea:Ka mahia te centrifugation i te pāmahana rūma, a kaore he hiahia mo te 4°C iti-mahana centrifugation me te waihanol precipitation o DNA.
◮Haumaru:Kaore he tangohanga reagent waro e hiahiatia ana.
◮Kounga teitei:Ko te DNA genomic kua tangohia he mahanga nui, kahore he RNA, kahore he RNase, he iti rawa te ihirangi katote, ka taea te whakatutuki i nga whakaritenga o nga momo whakamatautau.
◮Pūnaha moroiti:Ka taea e ia te whakanui ake i te kukū o te DNA genomic, he watea mo te rapunga o raro, te whakamatautau ranei.
Whakaahuatanga
Ka whakaratohia e tenei kete he tikanga whaihua me te tere ki te tiki i te DNA genomic tino kukū mai i nga tapahi buccal me te Kaari FTA (nga waahi toto).Ma te whakamahi i ta maatau kamupene's ahurei DNA-anake silica membrane tīwae miro me te tātai, ngā ki Foregene Protease, tiketike-kukū,-kounga tiketike DNA genomic taea te tango i roto i te 80 meneti.Ko te pou purenga iti i hangaia hei here i te DNA ira tangata, a ka taea te whakakore i te DNA ki te iti (15μl) pūnaha elution ki te whakapiki ake i te kukū o te DNA genomic kua whiwhi, he pai mo te rapunga o raro, whakamatautau ranei.Ka taea e te kete te tukatuka kotahi, neke atu ranei nga tauira i te wa kotahi, a, kaore e hiahiatia e te tukanga purenga te tangohanga o nga matū pararopi penei i te phenol, chloroform, me te isopropanol te wa e kai ana, te wai ethanol precipitation ranei, a he ngawari te mahi me te whakaora i te wa.
Whakatakotoranga
50 Whakaritenga
Nga waahanga kete
| Kaipupuri ST1 |
| Kaipupuri ST2 |
| Raina Acrylamide |
| Kaipupuri PW |
| Kaipupuri WB |
| Kaipupuri EB |
| Foregene Protease |
| DNA-anake Tīwae |
| Tohutohu |
Nga waahanga me nga painga
-Kaore he poke RNase: Ko te Tiwae DNA-anake e whakaratohia ana e te kete ka taea te tango i te RNA mai i te DNA genomic me te kore e taapiri i te RNase i te wa o te whakamatautau, me te karo i te taiwhanga kia kore e pokea e te RNase o waho.
-Te tere tere: He nui ake te mahi a Foregene Protease i nga momo porotease rite, he tere te keri tauira;mahi ngawari.
-He pai: Ka mahia te centrifugation i te pāmahana rūma, a kaore he hiahia mo te 4 ° C iti-mahana centrifugation ranei te waihā wai o te DNA.
-Haumaru: Kaore e hiahiatia te tangohanga reagent waro.
-Kounga teitei: Ko te DNA genomic kua tangohia he maha nga waahanga, kaore he RNA, kahore he RNase, me nga ihirangi katote tino iti, ka taea te whakatutuki i nga whakaritenga o nga momo whakamatautau.
-Punaha-Micro-elution: Ka taea e ia te whakanui ake i te kukū o te DNA genomic, he watea mo te rapunga o raro, te whakamatautau ranei.
Te tono kete
He pai mo te purenga o te DNA genomic mai i nga tauira e whai ake nei: nga tapahi buccal, Kaari FTA (nga toto toto).
Rokiroki me te ora o te Papa
-Ka taea te penapena i tenei kete mo nga marama 12 i raro i nga tikanga maroke i te pāmahana rūma (15-25 ° C);ki te hiahia kia penapena mo te wa roa, ka taea te penapena ki te 2-8°C.
Kia mahara: Ki te penapena ki te iti o te pāmahana, he pai te wairewa ki te ua.I mua i te whakamahinga, me waiho te otinga ki roto i te kete i te pāmahana rūma mo te wa roa.Mena e tika ana, whakamahana i roto i te kaukau wai 37°C mo te 10 meneti kia memeha ai te para, ka uru i mua i te whakamahi.
-Foregene Protease otinga he tātai ahurei, e kaha ana i te wa e rongoa ana i te pāmahana rūma mo te wa roa (3 marama);ka pai ake tana mahi me tana pumau ina rongoa ki te 4°C, no reira ka tūtohu kia penapena ki te 4°C, kia mahara kia kaua e pupuri i te -20°C.
Kua purua te pou purenga
I roto i tenei kete, i roto i te mahi tangohanga DNA genomic, ko te pou purenga ka uru tika ki runga i te tauira ranunga lysis enzymatic kaore he taahiraa centrifugation, a ka aukatihia te pou purenga na te kore o te enzymization me te viscosity teitei o te tauira.
Ko nga take e whai ake nei ko enei e whai ake nei:
1. Kore i oti te nakunaku enzymatic o nga tauira kiko.
Taunakitanga: Ko te wa tukatuka tauira o Foregene Protease ka taea te whakaroa tika, ka taea ranei te tango i te supernatant i muri i te centrifugation i te 12,000 rpm (~13,400 × g) mo te 5 min.
2. He nui te whakamahi i nga tauira kiko, i nga kopa nui ranei.
Taunakitanga: He pai ake kia kaua e neke ake i te 1 Buccal swab i roto i te tauira;ki te nui rawa te tauira, whakanuia te inenga o te Buffer ST1, Foregene Protease, parepare ST2.
3. He tiketike rawa te pokey tauira.
Taunakitanga: Ka taea te waimeha i nga tauira ki te 10 mM o Tris-HCl i mua i te tangohanga DNA ira.
4. Kua ngongo nga kongakonga o te kaari toto.
Taunakitanga: Ka taea te whakaroahia te wa o te centrifugation o te taahiraa 6 o te waahi toto (Kari FTA) tangohanga ira.
He iti, he kore DNA ranei
He maha nga momo ahuatanga e pa ana ki te whakaputanga DNA genomic, tae atu ki te takenga tauira, nga tikanga rokiroki tauira, te whakarite tauira, te raweke, aha atu.
Ko te DNA genomic kaore e taea te tiki i te wa tangohanga
Ko nga take pea e whai ake nei:
1. Ko te kore e tika te tiaki tauira, te rokiroki ranei mo te roa rawa ka paheke te DNA ira.
Taunakitanga: Ko te pai ake kia whakatauirahia nga pania-waha, a, kaore i te pai kia whakamahia nga rapa mo nga mahi tangohanga DNA ira tangata;Ko nga tauira waahi toto me whakarite kia tika te kounga me te wa rokiroki kia kaua e roa rawa.
2. He iti rawa te whakamahi kikokiko ka kore e tangohia te DNA ira tangata e rite ana.
Taunakitanga: Whaia nga tohutohu mo te whakatauira mo te kaukau i roto i te aratohu mahi, me te muru i nga wa maha ka taea kia nui nga pūtau ka piri ki te kaukau waha mo te tangohanga DNA ira;mo te tangohanga tauira wahi toto, ka taea te whakanui tika i te waahi tapahi wahi toto.
3. Ko te Foregene Protease he kore e tiakina, na reira ka heke te mahi, ka kore ranei e whakakorikori.
Taunakitanga: Whakapumautia nga tikanga rokiroki o te Foregene Protease, whakakapi ranei ki tetahi Foregene Protease hou mo te tauhohenga enzymatic.
4. He roa rawa te tiaki i te kete, te wa rokiroki ranei, na te korenga o etahi waahanga o te kete.
Taunakitanga: Hokona he kete hou mo te Buccal swab DNA mo nga tikanga e pa ana.
5. Karekau a Buffer WB e taapirihia te waihano tino.
Taunakitanga: Whakapumautia ka taapirihia e te parapara WB te rōrahi tika o te waihā tino.
6. Kaore i te tika te taapiri i te eluent ki te kiriata silicone.
Taunakitanga: Taapirihia te 65 °C nga pata eluent i mua i te whakamahana ki waenganui o te kiriuhi silicone ka waiho i te pāmahana rūma mo te 5 meneti hei whakanui ake i te pai o te elution.
Ko te DNA genomic iti-hua kua wehea
Ko nga take e whai ake nei ko enei e whai ake nei:
1. Ko te kore e tika te tiaki tauira, te rokiroki ranei mo te roa rawa ka paheke te DNA ira.
Taunakitanga: He pai ake te whakatauirahia nga pania-waha, a kaua e whakamahia nga pania mo te tangohanga DNA ira.
2. Mēnā he iti rawa te rahi o te tauira kiko, ka iti ake te ihirangi DNA genomic kua tangohia.
Taunakitanga: Whaia nga tohutohu whakatauira pania-waha i roto i te aratohu whakahaere, horoia kia maha nga wa ka taea kia nui nga pūtau e piri ki te kaukau waha mo te tangohanga DNA ira.
3. Ko te Foregene Protease he kore e tiakina, na reira ka heke te mahi, ka kore ranei e whakakorikori.
Taunakitanga: Whakapumautia nga tikanga rokiroki o te Foregene Protease, whakakapi ranei ki tetahi Foregene Protease hou mo te tauhohenga enzymatic.
4. Nga raruraru pai.
Taunakitanga: Whakamahia te Buffer EB mo te elution;ki te whakamahi ddH2O, etahi atu eluent ranei, whakauhia ko te pH o te eluate kei waenganui i te 7.0-8.5.
5. Kaore i te tika te taapiri i te ruate.
Taunakitanga: Taapirihia nga pata eluent ki waenganui o te kiriuhi silicone ka waiho i te pāmahana rūma mo te 5 meneti hei whakanui ake i te pai o te elution.
6. He iti rawa te whakaemi o te wai elution.
Taunakitanga: Whakamahia te eluent mo te elution DNA genomic e hiahiatia ana i roto i nga tohutohu, kaua e iti iho i te 15 μl.
He iti te parakore o te DNA genomic kua wehea
Ko te iti o te maatanga o te DNA genomic ka kore e pai, ka kore ranei e pai nga hua o nga whakamatautau o raro, penei: kaore e taea te tapahi i nga whaariki, kaore e taea e te PCR te tango i te wahanga ira o te paanga, aha atu.
Ko nga take pea e whai ake nei:
1. Heteroprotein parahanga, RNA parahanga.
Tātaritanga: Kīhai te tīwae purenga i horoia mā te Buffer PW;karekau i horoia te pou horoi horoi Buffer PW ma te whakamahi i te tere centrifugal tika.
Taunakitanga: Me whakarite karekau he rerenga i roto i te supernatant i mua i te taapiri i te waihano;kia tino horoia te pou purenga kia rite ki nga tohutohu, a kaore e taea te whakakore i tenei taahiraa.
2. Parahanga katote poke.
Tātaritanga: Ko te tīwae horoi horoi Buffer WB i waihotia, i horoia ranei kotahi anake, ka puta he toenga katote.
Taunakitanga: Kia 2 nga wa horoi Buffer WB i runga i te whakahau kia tangohia nga toenga katote ka taea.
3. RNA whākōkī contamination.
Tātaritanga: I taapirihia nga RNases o Tawahi ki te parepare;I he te mahi horoi Buffer PW, ka puta he toenga RNase, ka pa ki nga mahi whakamatautau RNA o raro, penei i te tuhi in vitro.
Taunakitanga: Ka taea e nga kete wehenga waikawa karihi Foregene te tango i te RNA me te kore taapiri atu o te RNase, na reira karekau te Kete Wetewete DNA o te Kaari Utu / FTA te taapiri i te RNase;kia whai koe i nga tohutohu mo te pou horoi horoi Buffer PW, a kaore e taea te whakakore i tenei taahiraa.
4. Te toenga waihā.
Tātaritanga: Karekau a Buffer WB i mahi i te centrifugation ngongo kau i muri i te horoinga o te pou purenga.
Taunakitanga: Me tika te mahi centrifugation ngongo kau kia rite ki nga tohutohu.
5. Ētahi atu poke poke.
Tātaritanga: Ko nga tauira kua tiakina, he tauira motuhake ranei kaore i te rongoa.
Taunakitanga: Kia ata mahia te tauira kia rite ki te tohutohu.
