Kaihanga Haina mo te 2× Whakakotahitanga Premix mo te Tauira Kare i Purihia i te Wa Tuturu Ine Ine PCR Tirohanga Tiaki Taumaha Qpcr Mix Plus U
Ka mau tonu te whakahaere ki te kaupapa "whakahaere pūtaiao, te kounga teitei me te tino pai, te kaihoko nui mo te Kaihanga Haina mo te 2x Concentrated Premix mo te Tauira Kaore i Purihia mo te Waa Tuturu PCR Direct Multiplex Probe Qpcr Mix Plus U, Ko ta matou pakihi e whakatapua ana ki te tuku i nga kaihoko ki nga hua o te kounga teitei me te haumaru i te utu kaha, e pai ana ki a ia me nga kaihoko katoa.
Ka mau tonu te whakahaere i te kaupapa tikanga "whakahaere pūtaiao, te kounga teitei me te tino pai, te kaihoko rangatira moHaina Taq DNA Polymerase me Qpcr, He nui te kaha o to taatau kamupene, he punaha whatunga hokohoko pumau me te tino pai.Ko ta matou hiahia ka taea e matou te whakarite hononga pakihi pai me nga kaihoko katoa mai i te kaainga me waho i runga i nga painga o tetahi.
Tikanga Tuturu PCR maataapono hoahoa tuatahi
Primer Whakamua me te Primer Whakamuri
Mo PCR Wā Tuturu, he mea nui te hoahoa tuatahi.Ko nga kaupapa tuatahi e pa ana ki te motuhake me te kaha o te whakanui PCR, a ka taea te hoahoa ma te tohu ki nga kaupapa e whai ake nei:
- Te roa o te tuatahi: 18-30bp.
- Te ihirangi GC: 40-60%.
- Uara Tm: Ka taea e te rorohiko hoahoa tuatahi, penei i te Primer 5, te uara Tm o te tuatahi.Ko nga uara Tm o nga timatanga o runga me te taha whakararo kia tata tonu.Ka taea hoki te whakamahi i te tauira tatauranga Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).I te wa e mahi ana i te PCR, ka tohua te pāmahana i raro iho i te uara Tm tuatahi o te 5 °C hei pāmahana whakaenee (ka taea e te pikinga o te pāmahana whakaenee te whakanui ake i te motuhake o te tauhohenga PCR).
- Nga mea tuatahi me nga hua PCR:
- Ko te roa o te hua whakakaha PCR tuatahi he pai ki te 100-150bp.
- Me karohia nga tauira hoahoa i te waahanga hanganga tuarua o te tauira ka taea.
- Me karo i te hanga 2 neke atu ranei nga turanga taapiri i waenga i nga pito 3′ o nga puna tuatahi o te awa ki raro.
- Kare e taea e te turanga tauranga tuatahi 3′ te noho me te 3 taapiri G, C ranei.
- Ko nga mea tuatahi kaore he hanganga taapiri, ki te kore ka hangaia he hanganga makawe, ka pa ki te whakanui PCR.
- Me tohatoha te ATCG kia rite ki te raupapa tuatahi, me karohia te turanga 3′ hei T.
Apitihanga1:Cell TikaRT-qPCR Waehanga ketet mōkihi tāpiri
1.Cell Lysis Solution
| Rongoa Raihana Pūtau | |||
| Nga waahanga kete (24-puna puna lysis / puna) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| WahiI | Kaipupuri CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Kaipupuri ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| WahiII | Pūkōmuru DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Nga waahanga kete (20 μl pūnaha tauhohenga) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Nga waahanga kete (20 μl pūnaha tauhohenga) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20× ROX Waikano Tohutoro | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Ka mau tonu te whakahaere ki te kaupapa "whakahaere pūtaiao, te kounga teitei me te tino pai, te kaihoko nui mo te Kaihanga Haina mo te 2x Concentrated Premix mo te Tauira Kaore i Purihia mo te Waa Tuturu PCR Direct Multiplex Probe Qpcr Mix Plus U, Ko ta matou pakihi e whakatapua ana ki te tuku i nga kaihoko ki nga hua o te kounga teitei me te haumaru i te utu kaha, e pai ana ki a ia me nga kaihoko katoa.
Haina Kaihanga moHaina Taq DNA Polymerase me Qpcr, He nui te kaha o to taatau kamupene, he punaha whatunga hokohoko pumau me te tino pai.Ko ta matou hiahia ka taea e matou te whakarite hononga pakihi pai me nga kaihoko katoa mai i te kaainga me waho i runga i nga painga o tetahi.
Tikanga Tuturu PCR maataapono hoahoa tuatahi
Primer Whakamua me te Primer Whakamuri
Mo PCR Wā Tuturu, he mea nui te hoahoa tuatahi.Ko nga kaupapa tuatahi e pa ana ki te motuhake me te kaha o te whakanui PCR, a ka taea te hoahoa ma te tohu ki nga kaupapa e whai ake nei:
- Te roa o te tuatahi: 18-30bp.
- Te ihirangi GC: 40-60%.
- Uara Tm: Ka taea e te rorohiko hoahoa tuatahi, penei i te Primer 5, te uara Tm o te tuatahi.Ko nga uara Tm o nga timatanga o runga me te taha whakararo kia tata tonu.Ka taea hoki te whakamahi i te tauira tatauranga Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).I te wa e mahi ana i te PCR, ka tohua te pāmahana i raro iho i te uara Tm tuatahi o te 5 °C hei pāmahana whakaenee (ka taea e te pikinga o te pāmahana whakaenee te whakanui ake i te motuhake o te tauhohenga PCR).
- Nga mea tuatahi me nga hua PCR:
- Ko te roa o te hua whakakaha PCR tuatahi he pai ki te 100-150bp.
- Me karohia nga tauira hoahoa i te waahanga hanganga tuarua o te tauira ka taea.
- Me karo i te hanga 2 neke atu ranei nga turanga taapiri i waenga i nga pito 3′ o nga puna tuatahi o te awa ki raro.
- Kare e taea e te turanga tauranga tuatahi 3′ te noho me te 3 taapiri G, C ranei.
- Ko nga mea tuatahi kaore he hanganga taapiri, ki te kore ka hangaia he hanganga makawe, ka pa ki te whakanui PCR.
- Me tohatoha te ATCG kia rite ki te raupapa tuatahi, me karohia te turanga 3′ hei T.
Apitihanga1:Cell TikaRT-qPCR Waehanga ketet mōkihi tāpiri
1.Cell Lysis Solution
| Rongoa Raihana Pūtau | |||
| Nga waahanga kete (24-puna puna lysis / puna) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| WahiI | Kaipupuri CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Kaipupuri ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| WahiII | Pūkōmuru DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Nga waahanga kete (20 μl pūnaha tauhohenga) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Nga waahanga kete (20 μl pūnaha tauhohenga) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20× ROX Waikano Tohutoro | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Pukapuka Tohutohu:
