Escherichia coli O157:H7 Waikawa Nucleic Detection Kit (Te Tikanga Tirohanga Tirohanga PCR)
Whakaahuatanga kete:
Cat.Kao.FP102
Ka whakamahia mo te rapu tere me te tirotiro i te E. coli O157:H7 i roto i nga kai, nga kai, nga tauira wai me nga tauira taiao.
Whakaahuatanga
Ka whakamahia mo te rapu tere me te tirotiro i te E. coli O157:H7 i roto i te kai, te kai, nga tauira wai me nga tauira taiao.
[Maataupono whakamatautau]E ai ki te maataapono o te hangarau PCR rewharewha, ka hangaia nga tohu tuatahi me nga rangahau Taqman mo te ira motuhake o Escherichia coli O157: H7, ka kitea e te taputapu PCR kareoro, kia mohio ai te kitenga o te Escherichia coli O157: H7 Te kitenga o te DNA.
Ihirangi kete
Tuhipoka: Kaore i whakauruhia te tirotiro hongere ROX.
| Components | Whakatakotoranga | Quantity |
| Kaipupuri A | ngongo | 1 |
| Kaipupuri B | ngongo | 1 |
| Te whakahaere pai | ngongo | 1 |
| Mana kino | ngongo | 1 |
Whakamahinga Manakohia
Ka whakamahia mo te kitenga tere me te tirotiro i te E. coli O157:H7 i roto i te kai, te whangai, nga tauira wai me nga tauira taiao.
Nga Tikanga Rokiroki Me te Ra Whakamutunga
Rokiroki ki te -20 ℃ i roto i te pouri me te karo i te mīti tukurua me te rewa.
Ko 12 te wa manamarama, a ka whakaatuhia te ra whakaputa ki te kete o waho.
Nga Taonga Me Nga Whakapau
He taputapu PCR ine kare, he pu paipa me nga tohutohu taurite, he wiriwiri vortex, centrifuge paku.
Whakamahinga
1. Tukatuka Tauira
1.1 Momo tauira: He pai tenei kete mo te kai, te whangai, nga tauira wai me etahi atu tauira e whakapaehia ana kua pokea e Escherichia coli O157:H7.Mo nga hua mīti kua tukatuka-hohonu, nga inu me etahi atu matū kei roto he poaka, me horoi kia kore ai e pa ki te kohinga tohu rewharewha.
1.2 Tauira tukatuka: Tirohia te "GB 4789.10-2016 Kai Haumaru National Standard Food Microbiological Examination of Escherichia coli O157: H7 Test" mo te whakarite tauira, te ahurea whakarangatira me te wehe o Escherichia coli O157: H7.
- Ntangohanga waikawa ucleic
Tangohia te 20 mL o te wairewa whakarangatira i roto i te ngongo centrifuge 1.5 mL, tāpirihia te 200 μL o te microbial lysate (he kete taapiri e hiahiatia ana), te vortex mo te 30 hēkona, te centrifuge poto, ka waiho ki te taha.
He korero: Ko te tangohanga o te waikawa karihi mai i te lysate me whakaoti i roto i te 10 meneti, kaore e taea te penapena mo te wa roa.
3. Whakanui Waikawa Nucleic
3.1 Whakakāhia te taputapu PCR ine korakora hei whakamahi.
Ko te Kaipupuri A me te Kaipara B mai i te kete, rewa rawa, ka whakaahuru poto.Tāpirihia te 18 μL Buffer A me te 2 μL Buffer B ki ia ngongo tauhohenga PCR.Kātahi ka tāpirihia te 5 mL o ia mana tōraro, te waikawa karihi kua tangohia, me te mana pai ki roto i nga ngongo tauhohenga PCR, kapi nga ngongo, me te centrifuge poto.
3.3 Whakawhitihia te ngongo tauhohenga PCR ki te miihini PCR whiti, ka whakamahi i nga tikanga e whai ake nei ki te mahi i nga whakamatautau whakakaha: tohua te 25 mL mo te punaha tauhohenga, kohia nga tohu korikori i te 60°C mo ia huringa, ka tohua te FAM mo te hongere rapu.
| Hipanga | Papatono | Te maha o nga huringa |
| 1 | 37℃ 5min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30s (kohikohia te korikori) |
He aratohu mo te tātari rapanga
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Kaore he RNA e taea te tango, he iti ranei te hua o te waikawa karihi
He maha nga mea e pa ana ki te pai o te whakaora, penei i: tauira ihirangi RNA, tikanga mahi, rōrahi elution, etc.
Te tātari i nga take noa:
1.Ice pati ranei iti-mahana (4 ° C) centrifugation i roto i te mahi.
Huatau: Te pāmahana rūma (15-25 ° C) te mahi, kaua rawa he pati hukapapa me te centrifuge pāmahana iti.
2. He pai te rokiroki tauira, te rokiroki tauira ranei mo te roa rawa.
Huatau: Whakaorangia nga tauira ki te -80 ° C, whakatio ranei i roto i te hauota wai, ka karo i te whakamahi whakatio-rewa;ngana ki te whakamahi i nga tauira hou kua kohia mo te tangohanga RNA.
3.Kore rawaka te lysis tauira
Taunakitanga: Tena koa kia tino uru te tauira me te otinga mahi (Linear Acrylamide) me te whakawhao mo te 10 meneti i te pāmahana rūma (15-25 ° C)
4. I hē te whakaurunga o te eluent
Taunakitanga: Me mohio kei te taapirihia te RNase-Free ddH2O ki waenganui o te kiriuhi o te pou purenga.
5.Ko te rōrahi hē o te waihā anhydrous i Buffer viRW2
Huatau: Me whai i nga tohutohu, taapirihia te rōrahi tika o te waihā anhydrous ki Buffer viRW2 ka uru pai i mua i te whakamahi i te kete.
6.Whakamahinga tauira kino.
Huatau: 200µl o te tauira mo ia 500µl o Buffer viRL.Ko te nui o te rahinga tauira ka heke te tere tangohanga RNA.
7. Rōrahi hīkoi hē, hauhā kore rānei.
Huatau: Ko te rōrahi eluent o te tīwae pure ko 30-50μl;Mena kaore i te pai te paanga o te hau, ka tūtohu kia taapirihia te RNase-Free ddH kua whakamahana i mua i te wera.2O me te whakawhānui i te wa tuu i te pāmahana rūma, pērā i 5-10min
8. He toenga waiwaro i muri i te horoinga i roto i te Buffer viRW2.
Huatau: Mena kei te noho tonu te waihano i muri i te horoinga i roto i te Buffer viRW2 me te centrifugation ngongo kau mo te 2min, ka waiho te pou purenga ki te pāmahana rūma mo te 5min i muri i te centrifugation ngongo putua kia tangohia katoa te toenga waihano.
Te paheketanga o nga ngota ngota RNA kua purea
Ko te kounga o te RNA kua purea e pa ana ki nga mea penei i te rokiroki tauira, te poke RNase, me te mahi.
Te tātari i nga take noa:
1.Ko nga tauira kua kohia kaore i tiakina i te wa.
Huatau: Ki te kore e whakamahia te tauira i muri i te kohikohinga, rongoatia ki te -80 ℃, hauota wai ranei.Mo te tangohanga ngota ngota RNA, ngana ki te whakamahi i nga tauira katahi ano ka kohia ina taea.
2. Ko nga tauira kua kohia i te mīti me te rewa totika.
Huatau: Me karo i te tio me te whakamaroke (kaua e neke ake i te kotahi) i te wa e kohikohi ana me te rokiroki tauira, ki te kore ka heke te hua o te waikawa karihi.
3.I whakauruhia a RNase ki roto i te rūma whakahaere, karekau ranei he karapu tuku, he kanohi kanohi, aha atu.
Huatau: Ko te tangohanga o nga ngota ngota RNA he pai ake te mahi i roto i tetahi ruma mahi RNA motuhake, a ka horoia te teepu whakamatautau i mua i te whakamatautau.Whakamaua nga karapu tuku me nga kanohi kanohi i te wa o te whakamatautau kia kore ai e paheke te RNA na te whakaurunga o RNase.
4.Ko te reagent kua poke e RNase i te wa e whakamahia ana.
Huatau: Whakakapihia ki te Kete Wetewete RNA Viral hou mo nga whakamatautau e pa ana.
5.Ko te whakapokenga RNase o nga ngongo centrifuge, nga tohutohu pipette, me etahi atu He whakaaro: Me mohio ko nga ngongo centrifuge, nga tohutohu pipette, me nga pipette he RNase-Free katoa.
Ko nga ngota ngota RNA kua purea i pa ki nga whakamatautau o raro
Ko nga ngota ngota RNA e purea ana e te pou purenga ka pa ki nga whakamatautau o raro mena he nui rawa nga katote tote, nga pūmua ranei, penei i te: whakawhiti whakamuri, Northern Blot, etc.
1.He katote tote e toe ana i roto i nga ngota ngota RNA kua whakakorehia.
Taunakitanga: Me mohio kua taapirihia te rōrahi tika o te waiwaro anhydrous ki te Buffer viRW2, ka horoi kia rua nga wa o te pou purenga kia rite ki te tere o te centrifugation tika i runga i nga tohutohu whakahaere; Mena kei te toe tonu nga katote tote, ka taea e koe te taapiri i te Buffer viRW2 ki te pou purenga, ka waiho ki te pāmahana rūma mo te 5min.Na ka mahi centrifugation ki te tango i te poke katote tote ki te whānuitanga nui
2.Kei te toenga o te waiwaro kei roto i nga ngota ngota RNA kua whakakorehia
Huatau: kia whakaū kua horoia nga pou purenga e Buffer viRW2, mahia te centrifugation ngongo kau kia rite ki te tere o te centrifugal i runga i nga tohutohu whakahaere.Mēnā kei te toe tonu te waihā, ka waiho mō te 5 meneti i te pāmahana rūma i muri i te pūngao ngongo putua hei tango i te toenga waihā ki te whānuitanga nui.
Pukapuka Tohutohu:
RNA Isolation Kit Manual Manual
