Ko te whakatutuki i te pai o nga kaihoko ko te kaupapa a to kamupene kaore he mutunga.Ka whakapau kaha matou ki te whakaputa i nga taonga hou me te kounga teitei, ki te whakatutuki i o whakaritenga motuhake me te whakarato ki a koe nga ratonga i mua i te hoko, i runga i te hoko me muri-hoko mo te Top Quality China Universal Blue Sybr GreenQpcr Master Mixme te Kowhai Tauira Dilution Buffer, Ko ta matou e whai ana kia mau tonu te mahi auaha o te punaha, te whakahaere houtanga, te auahatanga rangatira me te auahatanga o te umanga, ka whai waahi katoa ki nga painga katoa, me te whakapai tonu i nga ratonga kounga teitei.
Ko te whakatutuki i te pai o nga kaihoko ko te kaupapa a to kamupene kaore he mutunga.Ka whakapau kaha matou ki te whakaputa i nga taonga hou me te kounga teitei, ki te whakatutuki i o whakaritenga motuhake me te tuku atu ki a koe i mua i te hoko, i runga i te hoko me nga ratonga i muri i te hoko.Haina Qpcr Premix, Qpcr Master Mix, Neke atu i te 50,000 nga ota hoko mai i a maatau paetukutuku i ia tau, ka tino angitu mo te hokohoko ipurangi i Hapani.Ka koa matou ki te whai waahi ki te mahi pakihi me to kamupene.Titiro whakamua ki te whiwhi i to korero!

Whakaahuatanga

Ka whakamahia e tenei kete he punaha putunga lysis motuhake ka taea te tuku tere i te RNA mai i nga tauira pūtau ahurea mo nga tauhohenga RT-qPCR, na reira ka whakakore i te mahi purei RNA e pau ana te wa me te mahi.Ko te tauira RNA ka taea i roto i te 7 meneti noa iho.Ko te 5×Direct RT Mix me te 2×Direct qPCR Mix-SYBR reagents e whakaratohia ana e te kete ka taea te whiwhi tere me te whai hua i nga hua PCR ine i te waa.

5×Direct RT Mix me 2×Direct qPCR Mix-SYBR he kaha te aukati aukati, a ka taea te whakamahi i te lysate o nga tauira hei tauira mo RT-qPCR tika.Kei roto i tenei kete te RNA high-affinity Foregene reverse transcriptase, me Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl₂, tauhohenga buffer, PCR optimizer and stabilizer.

Whakatakotoranga

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Nga waahanga kete

Nga waahanga me nga painga

■ He ngawari me te whai hua : me te hangarau Cell Direct RT, ka taea te whiwhi tauira RNA i roto i te 7 meneti noa.

■ He iti te tono tauira, tae noa ki te 10 nga pūtau ka taea te whakamatautau.

■ Te whakaputanga teitei: ka taea te kite tere i te RNA i roto i nga pūtau i whakatipuria i roto i nga papa 384, 96, 24, 12, 6-puna.

■ Ka taea e te Kaimuku DNA te tango tere i nga momo ira i tukuna, ka tino whakaiti i te paanga ki nga hua whakamatautau ka whai ake.

■ Ko te punaha RT me te qPCR kua arotauhia ka pai ake te whakamaaramatanga whakamuri o te RT-PCR e rua, me te PCR motuhake ake, ka kaha ake te atete ki nga aukati tauhohenga RT-qPCR.

Te tono kete

Te whānuitanga o te tono: nga pūtau ahurea.

- RNA i tukuna e te tauira lysis: e tika ana ki te tauira RT-qPCR o tenei kete.

- Ka taea te whakamahi i te kete mo nga kaupapa e whai ake nei: te tātari whakaaturanga ira, te manatoko o te awenga wahangu o te ira i waenga i te siRNA, te tirotiro tarukino, aha atu.

Hoahoa

Rokiroki me te ora o te Papa

Ko te wahanga I o tenei kete me pupuri ki te 4 ℃;Ko te waahanga II me penapena ki te -20 ℃.

Ko te Foregene Protease Plus II me penapena ki te 4 ℃, kaua e whakatio ki te -20 ℃.

Reagent 2×Direct qPCR Mix-SYBR me penapena ki -20 ℃ i roto i te pouri;ki te whakamahia i nga wa maha, ka taea hoki te penapena ki te 4 ℃ mo te rokiroki mo te wa poto (whakamahia i roto i nga ra 10) .Ko te whakatutuki i te pai o nga kaihoko ko te kaupapa a to kamupene kaore he mutunga.Ka whakapau kaha matou ki te whakaputa i nga taonga hou me te kounga teitei, ki te whakatutuki i o whakaritenga motuhake me te whakarato ki a koe nga ratonga i mua i te hoko, i runga i te hoko me muri-hoko mo te Top Quality China Universal Blue Sybr GreenQpcr Master Mixme te Kowhai Tauira Dilution Buffer, Ko ta matou e whai ana kia mau tonu te mahi auaha o te punaha, te whakahaere houtanga, te auahatanga rangatira me te auahatanga o te umanga, ka whai waahi katoa ki nga painga katoa, me te whakapai tonu i nga ratonga kounga teitei.
Kounga teiteiHaina Qpcr Premix, Qpcr Master Mix, Neke atu i te 50,000 nga ota hoko mai i a maatau paetukutuku i ia tau, ka tino angitu mo te hokohoko ipurangi i Hapani.Ka koa matou ki te whai waahi ki te mahi pakihi me to kamupene.Titiro whakamua ki te whiwhi i to korero!

Tikanga Tuturu PCR maataapono hoahoa tuatahi

Primer Whakamua me te Primer Whakamuri

Mo PCR Wā Tuturu, he mea nui te hoahoa tuatahi.Ko nga kaupapa tuatahi e pa ana ki te motuhake me te kaha o te whakanui PCR, a ka taea te hoahoa ma te tohu ki nga kaupapa e whai ake nei:

Te roa o te tuatahi: 18-30bp.

Te ihirangi GC: 40-60%.

Uara Tm: Ka taea e te rorohiko hoahoa tuatahi, penei i te Primer 5, te uara Tm o te tuatahi.Ko nga uara Tm o nga timatanga o runga me te taha whakararo kia tata tonu.Ka taea hoki te whakamahi i te tauira tatauranga Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).I te wa e mahi ana i te PCR, ka tohua te pāmahana i raro iho i te uara Tm tuatahi o te 5 °C hei pāmahana whakaenee (ka taea e te pikinga o te pāmahana whakaenee te whakanui ake i te motuhake o te tauhohenga PCR).

Nga mea tuatahi me nga hua PCR:

Ko te roa o te hua whakakaha PCR tuatahi he pai ki te 100-150bp.

Me karohia nga tauira hoahoa i te waahanga hanganga tuarua o te tauira ka taea.

Me karo i te hanga 2 neke atu ranei nga turanga taapiri i waenga i nga pito 3′ o nga puna tuatahi o te awa ki raro.

Kare e taea e te turanga tauranga tuatahi 3′ te noho me te 3 taapiri G, C ranei.

Ko nga mea tuatahi kaore he hanganga taapiri, ki te kore ka hangaia he hanganga makawe, ka pa ki te whakanui PCR.

Me tohatoha te ATCG kia rite ki te raupapa tuatahi, me karohia te turanga 3′ hei T.

Tāpiritanga 1: Pūtau Direct RT-qPCR Kit mōkihi tāpiri wāhanga

1.Rongoa Raihana Pūtau