I mono te pou

I muri i te whakapiringa o te pou, ka heke te hua RNA, ka kore ranei e taea te pure i te RNA, a he iti te papatipu RNA kua riro.

Te tātari take noa:

1. Ko nga wehenga tauira kaore i tino rite.

Ko te pakaru o te tauira karekau e tino arai i te TAI WHAKAMAHI ADN, ka pa ki te hua me te kounga o te RNA.Ka tūtohu matou ki te mahi huri tere i roto i te hauota wai rawaka ina wahia e koe nga tauira, Whakamātauria ki te kuru i te tauira pakitara pūtau, kiriuhi pūtau me etahi atu kiko.Mo nga tauira tipu o te polyol polysaccharides, e taunaki ana matou kia whakamahia e koe te Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.

2. I te wa e momi ana te tauira hupa kua wehea me te Tiwae Whakapai-Ana, ka taea te ngongo i te rerenga pakaru o te pūtau.

Ko nga parataiao kua pakaruhia nga pūtau ka tangohia ka araia te Tiwae RNA-ONLY ka mahia ana te mahi RNA adsorption (tirohia te taahiraa 6).Ka tūtohu kia tupato koe i te wa e ngotea ana tenei supernatant kia kore ai e ngotea nga otaota pūtau.

3. He nui rawa te nama tuatahi.

Ko te nui o te whakamahi tauira ka hua mai he wehenga tauira kore oti, he lysis pūtau kore ranei na Buffer PSL1, ka mutu te aukati i te pou purenga i te wa e purea ana.Tipu Tapeke RNA Isolation Kit Ko ia tauira mahi kua purea he 50 mg.Mo nga tauira tipu o te polysaccharides polyol, e taunaki ana matou kia whakamatau koe i te Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.

4. He iti rawa te mahana o te centrifuge.

Ko te wehenga RNA katoa me te mahi purenga ka mahia i te pāmahana rūma (20-25°C), engari ko te kiko tauira ka pakaruhia e te hauota wai. Ko te pāmahana o etahi centrifuges cryogenic he iti iho i te 20℃, ka raru pea te Tiwae Whakapai DNA me te Tiwae RNA-anake/ranei.Mena ka puta tenei, tautuhia te pāmahana centrifuge ki te 20-25℃, aMe mohio kua whakamahana te ranunga lysis me/ranei te supernatant kua taapirihia ki te waihano ki te 37°C.

Kaore he RNA i tangohia, he iti ranei te hua RNA

He maha nga mea e pa ana ki te kaha o te whakaora, penei i te: tauira ihirangi RNA, tikanga mahi, te rōrahi elution, etc.

Te tātaritanga o nga take noa penei i raro nei:

1.I mahia he pati hukapapa iti ranei (4°C) centrifugation i te wa o te mahi.

Huatau: Mahi i te pāmahana rūma (15-25°C) i roto i te tukanga katoa, e kore e mahi i te tio pati me te iti pāmahana centrifugation.

2.Ko te RNA kua whakahekehia na te kore e tika te tiaki i te tauira, te tiakitanga roa ranei o te tauira.

Taunakitanga: Ko nga tauira katahi ano ka kohia me tere whakatotoka ki roto i te hauota wai, katahi ka rongoa ki te -80°C mo te wa roa, karohia te tio me te rewa o nga tauira;ka ruku tonu ranei nga tauira ki roto i te otinga RNA stabilizer RNAlater (tauira kararehe).

3.Ko te iti o te wehenga tauira me te lysis e arai ana ki te aukati i te pou purenga.

Huatau: I te wa e huri ana i te kiko, me whakarite kia tika te oneone, ka tere te whakawhiti ki te Buffer PSL1 kua oti te whakarite (whakapumauhia kua taapirihia te waahanga tika o te β-ME, tirohia te taahiraa 1 o te mahi).

4. I hē te whakaurunga o te eluent.

Huatau: Me mohio kei te maturuturu te RNase-Free ddH2O ki waenganui o te kiriuhi o te pou purenga.

5.Ko te rōrahi tika o te waihā pūmau kīhai i tāpirihia ki Buffer PSL2, Buffer PRW2 rānei.

Huatau: Whaia nga tohutohu, taapirihia te rōrahi tika o te waihā tino pūmau ki te Buffer PSL2 me te Buffer PRW2 ka uru pai i mua i te whakamahi i te kete.

6.Ko te nui o te tauira kiko kaore e tika.

Huatau: Whakamahia te 50 mg o te kiko mo te 500 μl o Buffer PSL1.Ma te nui rawa o te kiko ka whakaiti i te nui o te RNA ka tangohia, ka heke hoki te ma o te RNA ka puta.Ka tino taunaki matou kia kaua e neke ake te inenga tauira tuatahi i te 50 mg mo ia mahi tangohanga RNA.

7. Kore te rōrahi elution kore ranei.

Huatau: Ko te 50-200 μl te rōrahi eluent o te tīwae pure;Mena kaore i te pai te paanga o te elution, ka tūtohu kia roa te wa i te pāmahana rūma i muri i te taapiri i te RNase-Free ddH2O kua whakamahana, penei i te 5-10min.

8.Ko te tīwae purenga he toenga waihā i muri i te horoinga me te BufferPRW2.

Huatau: Mena ka whakahiahia te ngongo kau mo te 1 min, kei te toe tonu te waihano i muri i te horoinga i roto i te Buffer PRW2, ka taea e koe te whakanui ake i te wa o te centrifugation ngongo kau ki te 2 min, ka waiho ranei i te pou purea ki te pāmahana rūma mo te 5 min ki te tango katoa i te toenga waihā.

9.I he te whakamahi i te kete.

Huatau: Mo nga tauira tipu o nga polysaccharides polyphenolic, ma te whakamahi i nga kete noa penei i te Plant Total RNA Isolation Kit kaore pea e taea te tiki tauira RNA pai.Ka tūtohu matou kia whakamahia e koe te Plant Total RNA IsolationKit Plus, he mea hanga motuhake mo nga tauira tipu polyphenolic polysaccharide.He kete i hangaia mo te tango RNA mai i nga tauira tipu polyphenol me te polysaccharide.

He iti te uara OD260/OD280

Ko te whakamaaramatanga RNA me te ddH2O ka whakamahia mo nga panui spectrophotometer ka iti nga uara OD260/OD280.Ka tūtohu mātou ki te whakamahi i te 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (kaore i te RNase-Free ddH2O ki te whakakore i te RNA) ki te whiwhi i nga uara OD260/OD280 tino tika, tirohia te "RNA Concentration and Purification Assays" i te wharangi 19.

Ka whakahekehia te RNA kua purea

Ko te kounga o te RNA kua purea e pa ana ki nga mea penei i te tiaki tauira, te poke RNase, me te raweke.

Te tātari i nga take noa:

1.Ko nga tauira o te kikokiko kaore i te rongoa i te wa i muri i te kohinga.

Taunakitanga: Ki te kore e whakamahia nga tauira kiko i te wa i muri i te kohikohinga, penapenahia ki roto i te hauota wai i te pāmahana iti tonu, whakawhitia ranei ki te -80°C mo te rokiroki mo te wa roa i muri i te mīti tere ki roto i te hauota wai, ka rukuhia ranei nga tauira ki te otinga RNA stabilizer RNAlater solution (tauira kararehe).Mo te tangohanga RNA, ngana ki te whakamahi i nga tauira kiko kohi hou.

2.Te whakamaroke me te whakamaroke o nga tauira kiko.

He whakaaro: I te wa e penapena ana i nga tauira kiko, he pai ake kia tapahia ki nga wahi iti hei tiaki, ka tango i tetahi wahi o aua mea ka whakamahia hei karo i te paheketanga o te RNA na te whakatotoo me te whakamaroketanga o nga tauira.

3.Ka whakauruhia a RNase ki roto i te ruma mahi, kaore ranei e mau nga karapu tuku, he kanohi kanohi, aha atu.

He whakaaro: Ko nga whakamatautau tangohanga RNA he pai ake te mahi i roto i nga mahi RNA motuhake, me horoi te teepu taiwhanga i mua i te whakamatautau, me mau nga karapu tuku me nga kanohi kanohi i te wa o te whakamatautau kia kore ai e paheke te RNA na te whakaurunga o te RNase ki te nui rawa atu.

4.Ko te reagent kua poke e RNase i te wa e whakamahia ana.

Huatau: Whakakapihia ki te raupapa hou o nga kete tangohanga RNA katoa o te tipu mo nga whakamatautau e pa ana.

5.Ko nga ngongo centrifuge me nga tohutohu pipette e whakamahia ana mo te raweke RNA kua poke ki te RNase.

Huatau: Me mohio ko nga ngongo centrifuge, nga tohutohu pipette, nga pipettes, me etahi atu e whakamahia ana i te tangohanga RNA he RNase-Kore.

Pukapuka Tohutohu:

Tipu Tapeke RNA Isolation Kit Tāpiri Tohutohu