(96-pai) Putau Tere Tere RT-qPCR Kit – Taqman
Whakaahuatanga
Ko te(96-pai) TereEasyTM Pūtau Tika RT-qPCR Kit–Taqmanwhakaratohe punaha lysis buffer ahureito hohoro te tuku RNAmai i te pūtau ahureanga tauira mo nga tauhohenga RT-qPCR, ka whakakore i te wa-kai me te mahiKo te tukanga purenga RNA, me te 7 meneti noa te roa ki te tiki i te tauira RNA e hiahiatia ana.Ko te5× Direct RT Mixa2× Tikanga qPCR Mix-SYBRwhakaratohia i roto i te pouaka ka taea te tere me tewhai hua te whiwhi ine ine-waahiNga hua PCR.
5× Direct RT Mix me te 2× Direct qPCR Mix-Taqman he kaha te aukati i te aukati, a ka taea te whakamahi i te lysate o te tauira kia whakamatauria hei tauira mo te whakamaoritanga whakamuri pai me te whakakaha motuhake.Kei roto i te reagent ko Foregene Reverse Transcriptase ahurei me te tino hononga mo te RNA, me te Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , parepare tauhohenga, PCR optimizer and stabilizer , a ka taea te whakamahi i te taha o te lysis buffer ki te kite i te tauira tere, ngawari me te tika, a, kei a ia nga ahuatanga o te aro nui, te tino kaha me te pai o te pumau.
E whai ana te kete ki te lysis pūnaha moroiti o 96-pai ahurea pūtau, a he pai te ōritetanga me te rite;Ko nga waahanga kete e whakarato ana i te 96 tauhohenga lysis, 96 tauhohenga whakawhiti whakamuri me te 96x2 qPCR tauhohenga, ka taea te tutuki i te pereti 96-puna mo te whakamahi kotahi, ka karo i te parahanga na te whakatuwheratanga, te mīti me te rewa o nga reagents me te paheketanga o te mahi reagent.
Nga waahanga kete
| Te titonga kete ( 50 μL lysis system/20μLRT pūnaha tauhohenga /20μL qPCR pūnaha tauhohenga) | DRT-03021 | Korero | |
| 96T | |||
| WahiI | KaipupuriCL | 5 mL | PūtauRaihi |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| KaipupuriST | 500 μL | ||
| Wahi II | DNAKaimuku | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Tikanga qPCR Mix-Takamana | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Waikano Tohutoro | 400µL | ||
| RNase- Kore utuddH2 O | 1.7mL |
| |
| Mtau | 1 wahi | 1 tohanga | |
*: Ko te lysis reagent DNA Eraser kei roto i te Wahanga II o te kete;Ka taea te hoko motuhake i nga waahanga Lysis, RT, me te qPCR.
Nga waahanga me nga painga
■He ngawari me te whai hua : me te hangarau Cell Direct RT, ka taea te tiki tauira RNA i roto i te 7 meneti noa.
■ He iti te tono tauira, tae noa ki te 10 nga pūtau ka taea te whakamatautau.
■ Te whakaputanga teitei: ka taea te kite tere i te RNA i roto i nga pūtau i whakatipuria i roto i nga papa 384, 96, 24, 12, 6-puna.
■ Ka taea e te Kaimuku DNA te tango tere i nga momo ira i tukuna, ka tino whakaiti i te paanga ki nga hua whakamatautau ka whai ake.
■ Ko te punaha RT me te qPCR kua arotauhia ka pai ake te whakamaaramatanga whakamuri o te RT-PCR e rua, me te PCR motuhake ake, ka kaha ake te atete ki nga aukati tauhohenga RT-qPCR.
Te tono kete
Te whānuitanga o te tono: nga pūtau ahurea.
- RNA i tukuna e te tauira lysis: e tika ana ki te tauira RT-qPCR o tenei kete.
- Ka taea te whakamahi i te kete mo nga kaupapa e whai ake nei: te tātari whakaaturanga ira, te manatoko o te awenga wahangu o te ira i waenga i te siRNA, te tirotiro tarukino, aha atu.
Rokiroki me te ora o te Papa
Ko te wahanga I o tenei kete me pupuri ki te 4℃;Ko te waahanga II me penapena ki te -20 ℃.
Ko te Foregene Protease Plus II me penapena ki te 4℃, kaua e whakatio ki te -20 ℃.
Reagent 2×Ko Direct qPCR Mix-Taqman me penapena ki -20℃i roto i te pouri;ki te whakamahia auau, ka taea hoki te penapena ki te 4℃ mo te rokiroki mo te wa poto (whakamahia i roto i nga ra 10).
Tikanga Tuturu PCR maataapono hoahoa tuatahi
Primer Whakamua me te Primer Whakamuri
Mo PCR Wā Tuturu, he mea nui te hoahoa tuatahi.Ko nga kaupapa tuatahi e pa ana ki te motuhake me te kaha o te whakanui PCR, a ka taea te hoahoa ma te tohu ki nga kaupapa e whai ake nei:
- Te roa o te tuatahi: 18-30bp.
- Te ihirangi GC: 40-60%.
- Uara Tm: Ka taea e te rorohiko hoahoa tuatahi, penei i te Primer 5, te uara Tm o te tuatahi.Ko nga uara Tm o nga timatanga o runga me te taha whakararo kia tata tonu.Ka taea hoki te whakamahi i te tauira tatauranga Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).I te wa e mahi ana i te PCR, ka tohua te pāmahana i raro iho i te uara Tm tuatahi o te 5 °C hei pāmahana whakaenee (ka taea e te pikinga o te pāmahana whakaenee te whakanui ake i te motuhake o te tauhohenga PCR).
- Nga mea tuatahi me nga hua PCR:
- Ko te roa o te hua whakakaha PCR tuatahi he pai ki te 100-150bp.
- Me karohia nga tauira hoahoa i te waahanga hanganga tuarua o te tauira ka taea.
- Me karo i te hanga 2 neke atu ranei nga turanga taapiri i waenga i nga pito 3′ o nga puna tuatahi o te awa ki raro.
- Kare e taea e te turanga tauranga tuatahi 3′ te noho me te 3 taapiri G, C ranei.
- Ko nga mea tuatahi kaore he hanganga taapiri, ki te kore ka hangaia he hanganga makawe, ka pa ki te whakanui PCR.
- Me tohatoha te ATCG kia rite ki te raupapa tuatahi, me karohia te turanga 3′ hei T.
Apitihanga1:Cell TikaRT-qPCR Waehanga ketet mōkihi tāpiri
1.Cell Lysis Solution
| Rongoa Raihana Pūtau | |||
| Nga waahanga kete (24-puna puna lysis / puna) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| WahiI | Kaipupuri CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Kaipupuri ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| WahiII | Pūkōmuru DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Nga waahanga kete (20 μl pūnaha tauhohenga) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Nga waahanga kete (20 μl pūnaha tauhohenga) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20× ROX Waikano Tohutoro | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Pukapuka Tohutohu:
